過氧化物酶是一個(gè)小分子(MW?40 KD),通??梢砸?:1的比率與抗體偶聯(lián)。由于其體積小,它很少會(huì)引起抗體/抗原復(fù)合物形成的位阻問題。與其他標(biāo)記酶相比,過氧化物酶便宜。與過氧化物酶有關(guān)的主要缺點(diǎn)是它們對(duì)許多防腐劑的耐受性低,即使在低濃度下也能使過氧化物酶的活性失活。HRP偶聯(lián)物被廣泛用作ELISA,免疫組織化學(xué)技術(shù)以及Northern,Southern和Western印跡分析的輔助檢測(cè)試劑。我們提供一種快速,快速(10分鐘)的HRP分析,它是一步一步,均勻,無需洗滌的分析系統(tǒng)。該試劑盒可用于ELISA,表征酶反應(yīng)動(dòng)力學(xué)以及高通量篩選氧化酶抑制劑等。
平臺(tái)
吸光度酶標(biāo)儀 | |
吸光度 | 576±5納米 |
推薦板 | 清除底部 |
熒光酶標(biāo)儀 | |
激發(fā) | 540納米 |
發(fā)射 | 590納米 |
隔斷 | 575納米 |
推薦板 | 純黑色 |
組件
組分A:Amplite™紅色過氧化物酶底物 | 1個(gè)小瓶 |
成分B:H2O2 | 1小瓶(3%穩(wěn)定溶液,200 µL) |
組分C:測(cè)定緩沖液 | 1瓶(100毫升) |
組分D:辣根過氧化物酶 | 1瓶(20單位) |
成分E:DMSO | 1小瓶(1毫升) |
準(zhǔn)備HRP標(biāo)準(zhǔn)和/或測(cè)試樣品(50 µL)
加入HRP工作溶液(50 µL)
在室溫下孵育10-30分鐘
監(jiān)測(cè)Ex / Em = 540/590 nm(截止= 575 nm)的熒光強(qiáng)度
重要筆記
開始實(shí)驗(yàn)之前,請(qǐng)?jiān)谑覝叵陆鈨鏊性噭┖薪M件。在硫醇如DTT和β-巰基乙醇的存在下,組分A是不穩(wěn)定的。濃度高于10 µM的硫醇的存在會(huì)大大降低測(cè)定的動(dòng)態(tài)范圍。NADH和guguanggantai(還原形式:GSH)可能會(huì)干擾測(cè)定。
儲(chǔ)備溶液的制備
除非另有說明,否則所有未使用的儲(chǔ)備溶液應(yīng)分為一次性使用的等分試樣,并在制備后儲(chǔ)存在-20°C下。避免重復(fù)凍融循環(huán)。
1. Amplite™紅色過氧化物酶底物儲(chǔ)備液(100X):
將250 µL DMSO(組分E)添加到Amplite™紅色過氧化物酶底物(組分A)的小瓶中,制成100X Amplite™紅色過氧化物酶底物原液。儲(chǔ)備溶液應(yīng)及時(shí)使用。遠(yuǎn)離光線。
2. HRP標(biāo)準(zhǔn)溶液(20 U / mL):
將1 mL測(cè)定緩沖液(組分C)添加到辣根過氧化物酶(組分D)小瓶中,制成20 U / mL HRP標(biāo)準(zhǔn)溶液。
3. H 2 O 2儲(chǔ)備溶液(20 mM):
將22.7 µL的3%H 2 O 2(0.88 M,組分B)添加到977 µL的測(cè)定緩沖液(組分C)中,制成20 mM H 2 O 2儲(chǔ)備溶液。注意:稀釋的H 2 O 2溶液不穩(wěn)定。未使用的部分應(yīng)丟棄。
配制標(biāo)準(zhǔn)溶液
為了方便起見,請(qǐng)使用我們的系列稀釋計(jì)
在1999 µL分析緩沖液(組分C)中加入1 µL 20 U / mL HRP標(biāo)準(zhǔn)溶液,得到10 mU / mL HRP標(biāo)準(zhǔn)溶液(SD7)。取10 mU / mL HRP標(biāo)準(zhǔn)溶液(SD7)并進(jìn)行1:3連續(xù)稀釋,以使用測(cè)定緩沖液(組分C)獲得連續(xù)稀釋的HRP標(biāo)準(zhǔn)溶液(SD6- SD1)。
準(zhǔn)備工作溶液
將50μL的100X Amplite™紅色過氧化物酶底物儲(chǔ)備溶液和50μL的20 mM H 2 O 2儲(chǔ)備溶液添加到4.9 mL的測(cè)定緩沖液(組分C)中,制成HRP工作溶液。遠(yuǎn)離光線。
11551 | Amplite™比色法過氧化酶檢測(cè)試劑盒 *藍(lán)色* | Amplite™ Colorimetric Peroxidase Assay Kit *Blue Color* | 1 kit |
11552 | Amplite™熒光法過氧化酶檢測(cè)試劑盒 *紅色熒光* | Amplite™ Fluorimetric Peroxidase Assay Kit *Red Fluorescence* | 1 kit |
11553 | Amplite™熒光法過氧化酶檢測(cè)試劑盒 *近紅外熒光* | Amplite™ Fluorimetric Peroxidase Assay Kit *Near Infrared Fluorescence* | 1 kit |
11559 | Amplite™發(fā)光法過氧化酶檢測(cè)試劑盒 | Amplite™ Luminometric Peroxidase Assay Kit | 1 kit |