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3,3'-二氨基聯(lián)苯胺（DAB）已被用作zui常用的IHC色原，因?yàn)樗阋饲覍?duì)常規(guī)應(yīng)用敏感。但是，已證明DAB具有誘變性，并且對(duì)實(shí)驗(yàn)室工作人員和環(huán)境有害。為了解決這個(gè)問題，AAT Bioquest開發(fā)了這種新穎的Stayright™Purple，它比DAB更安全地用作IHC色原。此外，Stayright™Purple提供了一種快速簡(jiǎn)便的方法，可在HRP存在的情況下以DAB的高靈敏度產(chǎn)生干凈而強(qiáng)烈的紫色污漬。即用型Stayright™Purple HRP底物還顯示出非誘變作用，細(xì)胞毒性zui小。ReadiUse™Stayright™紫色過氧化物酶（HRP）底物適用于基于過氧化物酶（HRP）的免疫組織化學(xué)（IHC）和原位雜交（ISH）染色方法。基材是含有過氧化氫的穩(wěn)定的預(yù)混合溶液，因此無需任何混合步驟，即可使用。在HRP誘導(dǎo)的氧化作用下，Stayright™Purple在測(cè)定的目標(biāo)部位形成紫色不溶性沉淀產(chǎn)物。紫色zui終產(chǎn)品不溶于有機(jī)溶劑和有機(jī)固定介質(zhì)，因此可以通過常規(guī)的脫水和蓋玻片步驟保持明顯的紫色污點(diǎn)。
| 光學(xué)顯微鏡 | |
| 儀器規(guī)格 | 白光 |
- 在組織切片上涂抹即用型Stayright™Purple解決方案。
- 孵育組織切片5-15分鐘。
- 漂洗組織5-10分鐘，復(fù)染。
- 添加安裝介質(zhì)以覆蓋該部分。
程序
- 用即用型Stayright™Purple解決方案覆蓋部分。在室溫下孵育5-15分鐘。
- 將載玻片浸入dH 2 O中以停止顏色發(fā)展并監(jiān)控染色強(qiáng)度。如果染色強(qiáng)度不夠明亮，則需要更長(zhǎng)的孵育時(shí)間。您可以重新應(yīng)用Stayright™Purple解決方案來繼續(xù)開發(fā)。
- 用dH 2 O 洗滌5-10分鐘。
- 如果需要，請(qǐng)使用所需的復(fù)染色。
- 用乙醇脫水，然后固定在有機(jī)固定介質(zhì)中。
圖片
 圖1. FFPE肺腺癌組織中EpCAM的免疫組織化學(xué)檢測(cè)。將組織切片與聚-HRP共軛的山羊抗兔IgG孵育，然后分別用Stayright™Purple（左）或DAB（右）顯影。細(xì)胞也用蘇木精復(fù)染。Stayright™Purple產(chǎn)生的深層污漬具有高靈敏度和清晰的分辨率，類似于DAB。 |  圖2.固定了人肺腺癌組織樣品并對(duì)其進(jìn)行了EpCAM染色。將組織切片與抗EpCAM兔單克隆抗體（左）或同種型IgG作為陰性對(duì)照（右）一起孵育。然后將樣品與結(jié)合了HRP的山羊抗兔IgG抗體孵育，并用Stayright™Purple溶液顯影信號(hào)。Stayright™Purple可以產(chǎn)生干凈的紫色污漬，沒有背景。 |  圖3. Stayright™Purple和DAB對(duì)HeLa細(xì)胞增殖的細(xì)胞毒作用比較。AAT的WST-8測(cè)定法（Cat＃22770）用于確定約0、2、6、18、55、100、150、200、400、500、800或1000μg/ mL Stayright™處理
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