3,3'-二氨基聯(lián)苯胺（DAB）已被用作zui常用的IHC色原，因為它便宜且對常規(guī)應用敏感。但是，已證明DAB具有誘變性，并且對實驗室工作人員和環(huán)境有害。為了解決這個問題，AAT Bioquest開發(fā)了這種新穎的Stayright™Purple，它比DAB更安全地用作IHC色原。此外，Stayright™Purple提供了一種快速簡便的方法，可在HRP存在的情況下以DAB的高靈敏度產(chǎn)生干凈而強烈的紫色污漬。即用型Stayright™Purple HRP底物還顯示出非誘變作用，細胞毒性zui小。ReadiUse™Stayright™紫色過氧化物酶（HRP）底物適用于基于過氧化物酶（HRP）的免疫組織化學（IHC）和原位雜交（ISH）染色方法。基材是含有過氧化氫的穩(wěn)定的預混合溶液，因此無需任何混合步驟，即可使用。在HRP誘導的氧化作用下，Stayright™Purple在測定的目標部位形成紫色不溶性沉淀產(chǎn)物。紫色zui終產(chǎn)品不溶于有機溶劑和有機固定介質(zhì)，因此可以通過常規(guī)的脫水和蓋玻片步驟保持明顯的紫色污點。

1. 在組織切片上涂抹即用型Stayright™Purple解決方案。
2. 孵育組織切片5-15分鐘。
3. 漂洗組織5-10分鐘，復染。
4. 添加安裝介質(zhì)以覆蓋該部分。

程序

1. 用即用型Stayright™Purple解決方案覆蓋部分。在室溫下孵育5-15分鐘。
2. 將載玻片浸入dH ₂ O中以停止顏色發(fā)展并監(jiān)控染色強度。如果染色強度不夠明亮，則需要更長的孵育時間。您可以重新應用Stayright™Purple解決方案來繼續(xù)開發(fā)。
3. 用dH ₂ O 洗滌5-10分鐘。
4. 如果需要，請使用所需的復染色。
5. 用乙醇脫水，然后固定在有機固定介質(zhì)中。

圖片

圖1. FFPE肺腺癌組織中EpCAM的免疫組織化學檢測。將組織切片與聚-HRP共軛的山羊抗兔IgG孵育，然后分別用Stayright™Purple（左）或DAB（右）顯影。細胞也用蘇木精復染。Stayright™Purple產(chǎn)生的深層污漬具有高靈敏度和清晰的分辨率，類似于DAB。

圖2.固定了人肺腺癌組織樣品并對其進行了EpCAM染色。將組織切片與抗EpCAM兔單克隆抗體（左）或同種型IgG作為陰性對照（右）一起孵育。然后將樣品與結(jié)合了HRP的山羊抗兔IgG抗體孵育，并用Stayright™Purple溶液顯影信號。Stayright™Purple可以產(chǎn)生干凈的紫色污漬，沒有背景。

圖3. Stayright™Purple和DAB對HeLa細胞增殖的細胞毒作用比較。AAT的WST-8測定法（Cat＃22770）用于確定約0、2、6、18、55、100、150、200、400、500、800或1000μg/ mL Stayright™處理 45900 ReadiUse™Stayright™紫色* 20X HRP Chromogen預混有過氧化氫* ReadiUse™ Stayright™ Purple *20X HRP Chromogen Premixed with Hydrogen Peroxide* 5 ml 45901 ReadiUse™Stayright™紫色* 20X HRP Chromogen預混有過氧化氫* ReadiUse™ Stayright™ Purple *20X HRP Chromogen Premixed with Hydrogen Peroxide* 50 ml 45905 Stayright™紫色 Stayright™ Purple 5 ml 45906 Stayright™紫色 Stayright™ Purple 50 ml