會(huì)員.png)
6
脂質(zhì)小滴，也稱(chēng)為脂質(zhì)體，油體或脂肪體，是富含脂質(zhì)的細(xì)胞器，可調(diào)節(jié)中性脂質(zhì)的儲(chǔ)存和水解。它們還充當(dāng)許多重要生物過(guò)程（如脂肪酸和細(xì)胞danguchun）的脂質(zhì)來(lái)源的貯藏庫(kù)，以促進(jìn)能量，膜的形成和維持。細(xì)胞質(zhì)脂質(zhì)液滴的異常積累發(fā)生在多種病理狀況中，并且可以指示代謝缺陷或發(fā)病機(jī)理。AAT Bioquest的Cell Navigator™熒光脂質(zhì)滴測(cè)定試劑盒是一種簡(jiǎn)單的測(cè)定方法，可以定量測(cè)量脂質(zhì)滴的積累。試劑盒中使用Nile Green™進(jìn)行親脂性染色。Nile Green™在富含脂質(zhì)的環(huán)境中具有強(qiáng)烈的熒光性，而在水性介質(zhì)中具有zui小的熒光性。它是使用熒光顯微鏡，流式細(xì)胞儀或熒光酶標(biāo)儀檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)脂質(zhì)滴的ji佳的重要染色劑。與具有廣泛熒光光譜的尼羅河紅不同，尼羅河綠™僅用綠色熒光染色細(xì)胞內(nèi)脂質(zhì)小滴。它可以與其他熒光染料一起用于多色染色。使用FITC濾光片組可以觀(guān)察到綠色熒光信號(hào)。
| 熒光顯微鏡 | |
| 激發(fā) | FITC過(guò)濾器套件 |
| 發(fā)射 | FITC過(guò)濾器套件 |
| 推薦板 | 黑墻/透明底 |
| 熒光酶標(biāo)儀 | |
| 激發(fā) | 485納米 |
| 發(fā)射 | 520納米 |
| 隔斷 | 510納米 |
| 推薦板 | 黑墻/透明底 |
| 儀器規(guī)格 | 底讀模式 |
| 組件A：Nile Green™ | 1小瓶（在DMSO中為100 µL-200 X） |
| 組分B：染色緩沖液 | 1瓶（20毫升） |
用測(cè)試化合物準(zhǔn)備細(xì)胞
添加Nile Green™工作解決方案
在室溫或37°C下孵育10至30分鐘
使用FITC濾光片通過(guò)熒光顯微鏡讀取熒光強(qiáng)度
重要說(shuō)明
以下是我們推薦的活細(xì)胞實(shí)驗(yàn)方案。該協(xié)議僅提供指導(dǎo)，應(yīng)根據(jù)您的特定需求進(jìn)行修改。由于Nile Green™在水性介質(zhì)中的熒光極小，因此可以選擇抽吸生長(zhǎng)培養(yǎng)基以及在染色后去除Nile Green™染色溶液。染色的細(xì)胞可以用3-4％的甲醛固定。此外，可用Nile Green™染色溶液對(duì)有前綴的細(xì)胞（3-4％甲醛固定）進(jìn)行染色。
通過(guò)將5 µL 200X Nile Green™（組分A）稀釋到1 mL染色緩沖液（組分B）中來(lái)制備N(xiāo)ile Green™工作溶液。注意： 50 µL的Nile Green™（組分A）足以容納一個(gè)96孔板。避光。Nile Green™的*濃度取決于具體應(yīng)用?？梢愿鶕?jù)特定的細(xì)胞類(lèi)型和細(xì)胞或組織對(duì)探針的滲透性來(lái)改變?nèi)旧珬l件。
程序
對(duì)于貼壁細(xì)胞：
在96孔黑色壁/透明底板（100 µL /孔/ 96孔）中或在裝有適當(dāng)培養(yǎng)基的培養(yǎng)皿內(nèi)的蓋玻片上生長(zhǎng)細(xì)胞。
輕輕吸出培養(yǎng)基，并加入等體積（例如100 µL /孔/ 96孔板）的Nile Green™染色溶液。
將細(xì)胞在37°C，5％CO 2的培養(yǎng)箱中孵育10-30分鐘。
刪除Nile Green™工作溶液（可選）。
用酶標(biāo)儀讀取485/520 nm處的熒光，或使用帶有FITC濾光片組的熒光顯微鏡觀(guān)察細(xì)胞。
對(duì)于懸浮細(xì)胞：
以1000 rpm的速度離心細(xì)胞5分鐘，以得到每管1-5×10 5個(gè)細(xì)胞。
將細(xì)胞重懸于500 µL Nile Green™工作溶液中。
在避光條件下，于室溫或37°C孵育10至30分鐘。
離心除去Nile Green™工作溶液，然后將細(xì)胞重懸于500 µL預(yù)熱的培養(yǎng)基或您選擇的緩沖液中，以使每管1-5×10 5個(gè)細(xì)胞（可選）。
使用帶有FITC濾光片組的熒光顯微鏡監(jiān)控?zé)晒獾脑黾印?/p>
22730 Cell Navigator™熒光法脂滴檢測(cè)分析試劑盒*綠色熒光* Cell Navigator™ Fluorimetric Lipid Droplet Assay Kit *Green Fluorescence* 500 Tests 22735 Cell Navigator™熒光法脂滴檢測(cè)分析試劑盒*紅色熒光* Cell Navigator™ Fluorimetric Lipid Droplet Assay Kit *Red Fluorescence* 500 Tests
