鋅是必需的微量礦物質(zhì)元素，在許多生物過程中起著重要作用。它是許多酶，蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)和基因表達控制所必需的重要因素。鋅的狀態(tài)還影響細胞分裂，生長，分化，發(fā)育和衰老的基本過程。鋅缺乏的臨床體征包括肩周炎，免疫力低下，腹瀉，愈合不良，發(fā)育遲緩，性腺功能低下，胎兒生長衰竭，畸形和流產(chǎn)。在研究和藥物發(fā)現(xiàn)中非常需要簡單，直接和自動化就緒的測量程序。AAT Bioquest的Amplite™熒光鋅定量試劑盒提供了一種使用我們專有的Metaltel檢測生物樣品中鋅濃度的簡單方法；Zn 520，其中鋅以增強的熒光與探針結(jié)合。Zinc探針對Zn2 +的熒光響應(yīng)大大增強（大于200?300倍）。它具有較高的Zn2 +特異性，對其他金屬（包括Ca2 +，Mg2 +，Mn2 +和Cu2 +）的響應(yīng)很小。該測定法可用于生物學(xué)樣品，例如血清，血漿和尿液，檢測靈敏度為0.2 µM（13 ng / mL）。

1. 測試樣品（50 µL）或Zn ²⁺標準品

2. 添加鋅探針試劑（50 µL）

3. 在室溫下孵育5-10分鐘

4. 在Ex / Em = 485/525 nm處讀取熒光

重要說明
開始實驗之前，請在室溫下解凍所有試劑盒組件。

儲備溶液的制備

除非另有說明，否則所有未使用的儲備溶液應(yīng)分為一次性使用的等分試樣，并在制備后儲存在-20°C下。避免重復(fù)凍融循環(huán)。

1.鋅標準溶液（1 mM）：
將10 µL的100 mM ZnCl ₂標準溶液（組分C）添加到990 µL的測定緩沖液（組分B）中，得到1 mM ZnCl ₂標準溶液。

配制標準溶液

為了方便起見，請使用我們的系列稀釋計

將100 µL的1 mM鋅標準溶液添加到900 µL的測定緩沖液（組分B）中，以獲得100 µM的ZnCl ₂  標準溶液（Zn7）。然后，以100 µM ZnCl ₂標準溶液進行1：3的系列稀釋，以得到系列稀釋的ZnCl ₂標準液（Zn6-Zn1）。

準備工作溶液

將25 µL Metal Fluor™Zn 520（組分A）添加到5 mL測定緩沖液（組分B）中，制成Zn工作溶液。

程序

表1.固態(tài)黑色96孔微孔板中ZnCl ₂標準品和測試樣品的布局。Zn =鋅標準液（Zn1-Zn7，0.1至100 µM）；BL =空白對照；TS =測試樣品。

表2.每個孔的試劑分配。

1. 用測定緩沖液（組分B）將測試樣品稀釋至5-100 µM范圍。
   

2. 根據(jù)表1和表2提供的布局，準備ZnCl ₂標準品（Zn），空白對照（BL）和測試樣品（TS）。對于384孔板，每孔使用25 µL試劑代替50 µL 。
   

3. 在每個ZnCl ₂標準溶液，空白對照和測試樣品的孔中加入50 µL的鋅工作溶液，以使ZnCl ₂的總測定體積為100 µL /孔。對于384孔板，將25 µL鋅測定緩沖液添加到每個孔中，總體積為50 µL /孔。
   

4. 在避光條件下，于室溫下孵育反應(yīng)5-10分鐘。
   

5. 使用熒光板讀數(shù)器在Ex / Em = 485/525 nm處監(jiān)視熒光的增加。

   19000	Amplite™熒光法鋅離子定量試劑盒	Amplite™ Fluorimetric Zinc Ion Quantitation Kit	200 Tests
   19001	Amplite™比色法鋅離子定量試劑盒	Amplite™ Colorimetric  Zinc Ion Quantitation Kit	200 Tests
   19005	Amplite™熒光法汞離子定量試劑盒	Amplite™ Fluorimetric Mercuric Ion Quantitation Kit	200 Tests
   19501	ReadiUse™（TCA)法去除樣本蛋白試劑盒	ReadiUse™ TCA Deproteinization Sample Preparation Kit	200 Tests