活性氧（ROS）在細(xì)胞信號傳導(dǎo)和維持生理細(xì)胞代謝中很重要。過量的ROS會破壞細(xì)胞成分，從而與多種疾病相關(guān)，包括癌癥，代謝紊亂，神經(jīng)退行性疾病等。產(chǎn)生抗氧化劑，包括酶，大分子和小分子，以抵抗ROS引起的對生物體的傷害。體液，組織和細(xì)胞中抗氧化活性的定量分析提供了重要的生物學(xué)信息。我們的Amplite™比色抗氧化劑測定試劑盒使用ABTS作為抗氧化劑活性的比色指示劑，其依據(jù)是觀察到抗氧化劑具有防止ABTS（2，2'-疊氮基雙（3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸）氧化為辣根過氧化物酶（HRP）和過氧化氫（H2O2）的ABTS +。

1. 準(zhǔn)備樣品/ Trolox（10 µL）
2. 加入HRP工作溶液（20 µL）
3. 添加ReadiUse™ABTS底物溶液（150 µL）
4. 在室溫下孵育5分鐘
5. 監(jiān)控405 nm處的吸光度

重要說明
在開始實驗之前，將所有試劑盒組件平衡至室溫。

儲備溶液的制備

除非另有說明，否則所有未使用的儲備溶液應(yīng)分為一次性使用的等分試樣，并在制備后儲存在-20°C下。避免重復(fù)凍融循環(huán)。

1.辣根過氧化物酶（HRP）儲備溶液（2000X）：
將1毫升測定緩沖液（組分B）加到辣根過氧化物酶（組分A）小瓶中。

2. Trolox標(biāo)準(zhǔn)溶液（100 mM）：
將100 µL DMSO加到Trolox小瓶中（組分D）。

配制標(biāo)準(zhǔn)溶液

為了方便起見，請使用我們的系列稀釋計

通過使用稀釋因子= 2和zui高濃度= 1 mM在測定緩沖液（Componenet B）中稀釋100 mM Trolox標(biāo)準(zhǔn)溶液來制備Trolox標(biāo)準(zhǔn)溶液。

準(zhǔn)備工作溶液

HRP工作溶液（1X）：
將2.5 uL 2000X HRP儲備溶液添加到5 mL的測定緩沖液（組分B）中，制成1X HRP工作溶液。

程序

表1.在透明的96孔微孔板中的Trolox標(biāo)準(zhǔn)品和測試樣品的布局。SD = trolox標(biāo)準(zhǔn)品（SD1-SD7，1至0.0156 mM），BL =空白對照，TS =測試樣品。 

表2.每個孔的試劑組成。

1. 根據(jù)表1和表1中的布局，準(zhǔn)備trolox標(biāo)準(zhǔn)品（SD），空白對照（BL）和測試樣品（TS）（必要時在Assay Buffer中稀釋樣品，使抗氧化劑水平與Trolox處于同一范圍內(nèi)）。表2。
    
2. 在Trolox標(biāo)準(zhǔn)品，空白對照和測試樣品的每個孔中加入20 µL HRP工作溶液，使總體積為30 µL /孔。
    
3. 向每個孔中添加150 µL ReadiUse™ABTS底物溶液（組分C），總體積為180 µL /孔。注意：避免光照，并在聚丙烯容器中使用。
    
4. 在室溫下孵育5分鐘。注意：這5分鐘的保溫時間是一個指導(dǎo)原則?？梢愿淖兎跤龝r間以獲得更合適的吸光度。
    
5. 使用酶標(biāo)儀讀取405 nm處的吸光度。

   15900	Cell Meter™抗氧化活性檢測試劑盒	Cell Meter™ Colorimetric Antioxidant Activity Assay Kit	200 Tests
   15991	Cell Meter™比色法細(xì)胞內(nèi)脂質(zhì)氧化損傷(MDA)檢測試劑盒	Cell Meter™ Intracellular Colorimetric Lipid Peroxidation (MDA) Assay Kit	200 Tests
   16000	ROS Brite™活性氧熒光探針570	ROS Brite™ 570 *Optimized for Detecting Reactive Oxygen Species (ROS)*	1 mg
   16002	ROS Brite™活性氧熒光探針670	ROS Brite™ 670 *Optimized for Detecting Reactive Oxygen Species (ROS)*	1 mg
   16004	ROS Brite™活性氧熒光探針700 *體內(nèi)成像優(yōu)化*	ROS Brite™ 700 *Optimized for in Vivo Imaging*	1 mg