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堿性磷酸酶是一種高度敏感的酶，適用于ELISA，免疫組織化學(xué)，Northern，Southern和Western印跡應(yīng)用。它被廣泛用于各種生物學(xué)測(cè)定（尤其是免疫測(cè)定）和基于ELISA的診斷中。該Amplite™堿性磷酸酶檢測(cè)試劑盒使用發(fā)色磷酸酶底物pNPP定量溶液，細(xì)胞提取物以及固體表面（例如PVDF膜）中的堿性磷酸酶活性。該套件通過我們優(yōu)化的“混合和讀取”測(cè)定規(guī)程提供了所有*的成分，與HTS液體處理儀器兼容。
| 吸光度酶標(biāo)儀 | |
| 吸光度 | 400納米 |
| 推薦板 | 清除底部 |
| 成分A：pNPP（光敏） | 1個(gè)小瓶 |
| 組分B：測(cè)定緩沖液 | 1瓶（25毫升） |
| 組分C：堿性磷酸酶標(biāo)準(zhǔn)品 | 1小瓶（凍干粉，10單位） |
- 準(zhǔn)備堿性磷酸酶標(biāo)準(zhǔn)品和/或測(cè)試樣品（50 µL）
- 添加ALP工作溶液（50 µL）
- 在室溫或37 ° C下孵育10-30分鐘
- 監(jiān)測(cè)400 nm處的吸光度增加
重要說明
開始實(shí)驗(yàn)之前，請(qǐng)?jiān)谑覝叵陆鈨鏊性噭┖薪M件。
儲(chǔ)備溶液的制備
除非另有說明，否則所有未使用的儲(chǔ)備溶液應(yīng)分為一次性使用的等分試樣，并在制備后儲(chǔ)存在-20°C下。避免重復(fù)凍融循環(huán)。
1. pNPP儲(chǔ)備溶液（100X）：
將300 µL蒸餾水2 O加到pNPP小瓶中（組分A）。拌勻 應(yīng)立即使用pNPP儲(chǔ)備溶液。注意：如果正確存放，該溶液應(yīng)持續(xù)3-4周。
2.堿性磷酸酶標(biāo)準(zhǔn)溶液：向堿性磷酸酶標(biāo)準(zhǔn)溶液
（組分C，10單位）中添加100 µL 含0.1％BSA（H 2 O-0.1％BSA）的H 2 O 蒸餾液，以生成100單位/ mL堿性磷酸酶標(biāo)準(zhǔn)溶液。 。
配制標(biāo)準(zhǔn)溶液
為了方便起見，請(qǐng)使用我們的系列稀釋計(jì)
將10 µL的100單位/ mL堿性磷酸酶標(biāo)準(zhǔn)溶液添加到990 µL的H 2 O-0.1％BSA中，以生成1,000 mU / mL的堿性磷酸酶標(biāo)準(zhǔn)溶液。然后取100 µL 1,000 mU / mL堿性磷酸酶標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)行1:10稀釋，以獲得100 mU / mL堿性磷酸酶標(biāo)準(zhǔn)溶液（AS7）。然后執(zhí)行1：3連續(xù)稀釋以獲得剩余的標(biāo)準(zhǔn)液（AS6-AS1）。注意：稀釋的堿性磷酸酶標(biāo)準(zhǔn)溶液中未使用的部分應(yīng)丟棄。
準(zhǔn)備工作溶液
將50μLpNPP儲(chǔ)備溶液（100X）加入5 mL的測(cè)定緩沖液（組分B）中，使總體積為5.05 mL的p NPP工作溶液。
程序
表1.白色/透明底部96孔微孔板中堿性磷酸酶標(biāo)準(zhǔn)品和樣品的布局。AS =堿性磷酸酶標(biāo)準(zhǔn)品（AS1-AS7，0.1至100 mU / mL）; BL =空白控件；TS =測(cè)試樣品
| BL | BL | TS | TS |
| AS1 | AS1 | ... | ... |
| AS2 | AS2 | ... | ... |
| AS3 | AS3 | ||
| AS4 | AS4 | ||
| AS5 | AS5 | ||
| AS6 | AS6 | ||
| AS7 | AS7 |
表2.每個(gè)孔的試劑組成。
| 好 | 體積 | 試劑 |
| AS1-AS7 | 50微升 | 連續(xù)稀釋（0.1至100 mU / mL） |
| BL | 50微升 | H 2 O-0.1％牛血清白蛋白 |
| TS | 50微升 | 測(cè)試樣 |
在上清液中：
- 根據(jù)表1和2中提供的布局，準(zhǔn)備堿性磷酸鹽標(biāo)準(zhǔn)液（AS），空白對(duì)照（BL）和測(cè)試樣品（TS）。對(duì)于384孔板，每孔使用25 µL試劑，而不是50 µL。
- 將50 µL p NPP 工作溶液添加 到堿性磷酸鹽標(biāo)準(zhǔn)品，空白對(duì)照和測(cè)試樣品的每個(gè)孔中，以使總堿性磷酸鹽測(cè)定體積為100 µL /孔。對(duì)于384孔板，將25 µL pNPP工作溶液添加到每個(gè)孔中，總體積為50 µL /孔。
- 我 ncubate在10至30分鐘內(nèi)所需溫度的反應(yīng)中，避光。
- 使用吸光度板讀數(shù)器在400 nm處監(jiān)測(cè)吸光度的增加。
根據(jù)需要處理細(xì)胞。
在每個(gè)細(xì)胞孔中加入等體積的p NPP 工作溶液（例如100 µL / 96孔板或50 µL / 384孔板）。注意：或者，從細(xì)胞板中去除生長(zhǎng)培養(yǎng)基，并用5 mL蒸餾水2 ∶1 對(duì)5 mL工作溶液進(jìn)行1：1稀釋。然后加入100 µL（對(duì)于96孔板）或50 uL（對(duì)于將1：1稀釋的工作溶液稀釋到384孔板中）。
在避光條件下，將反應(yīng)在所需溫度下孵育30至60分鐘。
使用吸光度板讀數(shù)器在400 nm處監(jiān)測(cè)吸光度的增加。
11950 Amplite™比色法堿性磷酸酶檢測(cè)試劑盒 *黃色* Amplite™ Colorimetric Alkaline Phosphatase Assay Kit *Yellow Color* 1 kit 11952 Amplite™熒光法堿性磷酸酶檢測(cè)試劑盒 *藍(lán)色熒光* Amplite™ Fluorimetric Alkaline Phosphatase Assay Kit *Blue Fluorescence* 1 kit 11953 Amplite™熒光法堿性磷酸酶檢測(cè)試劑盒 *綠色熒光* Amplite™ Fluorimetric Alkaline Phosphatase Assay Kit *Green Fluorescence* 1 kit 11954 Amplite™熒光法堿性磷酸酶檢測(cè)試劑盒 *紅色熒光* Amplite™ Fluorimetric Alkaline Phosphatase Assay Kit *Near Infrared Fluorescence* 1 kit 11956 Amplite™堿性磷酸酶檢測(cè)試劑盒 *生物發(fā)光法* Amplite™ Luminometric Alkaline Phosphatase Assay Kit *Luminescence* 1 kit
