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髓過氧化物酶（MPO）是中性粒細(xì)胞和單核細(xì)胞中含量zui高的一種綠色血紅蛋白，具有過氧化物酶活性。它催化過氧化氫和鹵離子反應(yīng)形成細(xì)胞毒酸和其他中間體。并在依賴氧的殺死腫瘤細(xì)胞和微生物中發(fā)揮重要作用。MPO缺乏癥是該酶的一種遺傳性缺陷，易患免疫缺陷。對(duì)治療性MPO抑制劑的開發(fā)有相當(dāng)大的興趣。我們的Amplite™髓過氧化物酶測(cè)定試劑盒提供了一種快速，靈敏的方法來(lái)測(cè)定溶液和細(xì)胞裂解物中的髓過氧化物酶。它可以以方便的96孔或384孔微量滴定板形式進(jìn)行，無(wú)需分離步驟即可輕松實(shí)現(xiàn)自動(dòng)化。該套件使用我們的Amplite™Red底材，可實(shí)現(xiàn)雙重記錄模式。信號(hào)可以通過熒光酶標(biāo)儀或吸光度酶標(biāo)儀輕松讀取。使用Amplite™髓過氧化物酶測(cè)定試劑盒，在100 µL反應(yīng)體積中，我們僅檢測(cè)到0.1 mU / ml髓過氧化物酶。該試劑盒可以自動(dòng)化進(jìn)行MPO抑制劑的高通量篩選。
| 熒光酶標(biāo)儀 | |
| 激發(fā) | 540納米 |
| 發(fā)射 | 590納米 |
| 隔斷 | 570納米 |
| 推薦板 | 純黑色 |
組件
| 成分A：Amplite™紅色（光敏） | 1個(gè)小瓶 |
| 組分B：測(cè)定緩沖液 | 1瓶（20毫升） |
| 成分C：H2O2 | 1小瓶（100 µL，3％） |
| 成分D：髓過氧化物酶標(biāo)準(zhǔn)品 | 1小瓶（10 mU，凍干） |
| 成分E：DMSO | 1小瓶（200 µL） |
MPO標(biāo)準(zhǔn)品或測(cè)試樣品（50 µL）
添加MPO工作溶液（50 µL）
在室溫下孵育30-60分鐘
在Ex / Em = 540/590 nm處讀取熒光強(qiáng)度（截止570 nm）
重要說明
在開始實(shí)驗(yàn)之前，將所有套件組件解凍至室溫。
儲(chǔ)備溶液的制備
除非另有說明，否則所有未使用的儲(chǔ)備溶液應(yīng)分為一次性使用的等分試樣，并在制備后儲(chǔ)存在-20°C下。避免重復(fù)凍融循環(huán)。
1. Amplite™Red儲(chǔ)備液（250X）：
將40 µL DMSO（組分E）添加到Amplite™Red底物（組分A）的小瓶中。儲(chǔ)備溶液應(yīng)及時(shí)使用。注意：在硫醇（例如二硫蘇糖醇（DTT））存在下，Amplite™Red底物不穩(wěn)定。反應(yīng)中DTT的終濃度應(yīng)不高于10 µM。Amplite™Red底物在高pH（> 8.5）下也不穩(wěn)定。因此，反應(yīng)應(yīng)在pH 7 – 8下進(jìn)行。建議使用提供的測(cè)定緩沖液pH 7.4。
2. H 2 O 2儲(chǔ)備溶液（500X，10 mM）：
將10 µL的3％H 2 O 2（0.88M，組分C）添加到870 µL的測(cè)定緩沖液（組分B）中。注意：稀釋的H 2 O 2溶液不穩(wěn)定。未使用的部分應(yīng)丟棄。
3.髓過氧化物酶（MPO）標(biāo)準(zhǔn)溶液（200 mU / mL）：
將50 µL測(cè)定緩沖液（組分B）加入到瓶中。注意：一個(gè)小瓶包含大約5-10 mU髓過氧化物酶。
配制標(biāo)準(zhǔn)溶液
為了方便起見，請(qǐng)使用我們的系列稀釋計(jì)
將20 µL的200 mU / mL MPO標(biāo)準(zhǔn)溶液添加到380 µL的測(cè)定緩沖液（組分B）中，以獲得10 mU / mL的MPO標(biāo)準(zhǔn)溶液（MPO7）。取10 mU / mL MPO標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)行1：3的系列稀釋，以得到剩余的系列稀釋的MPO標(biāo)準(zhǔn)液（MPO6- MPO1）。
準(zhǔn)備工作溶液
將20μLAmplite™紅色儲(chǔ)備溶液（250X）和10μLH 2 O 2（500X）加入5 mL的測(cè)定緩沖液（組分B）中，使總體積為5.03 mL MPO工作溶液。避光。
程序
表1.在96孔黑色實(shí)心微孔板中MPO標(biāo)準(zhǔn)品和測(cè)試樣品的布局。MPO =髓過氧化物酶標(biāo)準(zhǔn)品（MPO1- MPO7，0.01至10 mU / mL）; BL =空白控件；TS =測(cè)試樣品。
| BL | BL | TS | TS |
| MPO1 | MPO1 | ... | ... |
| MPO2 | MPO2 | ... | ... |
| MPO3 | MPO3 | ||
| MPO4 | MPO4 | ||
| MPO5 | MPO5 | ||
| MPO6 | MPO6 | ||
| MPO7 | MPO7 |
表2. 每個(gè)孔的試劑組成。請(qǐng)注意，由于Amplite™Red底物過度氧化（變成非熒光產(chǎn)物），高濃度的MPO可能導(dǎo)致熒光信號(hào)降低。
| 好 | 體積 | 試劑 |
| MPO1-MPO7 | 50微升 | 連續(xù)稀釋（0.01至10 mU / mL） |
| BL | 50微升 | 分析緩沖液（組分B） |
| TS | 50微升 | 測(cè)試樣本 |
根據(jù)表1和2中提供的布局，準(zhǔn)備髓過氧化物酶標(biāo)準(zhǔn)品（MPO），空白對(duì)照（BL）和測(cè)試樣品（TS）。對(duì)于384孔板，每孔使用25 µL試劑代替50 µL。
將50 µL MPO工作溶液添加到髓過氧化物酶標(biāo)準(zhǔn)品，空白對(duì)照和測(cè)試樣品的每個(gè)孔中，使總MPO測(cè)定體積為100 µL /孔。對(duì)于384孔板，將25 µL MPO工作溶液添加到每個(gè)孔中，總體積為50 µL /孔。
在避光條件下，室溫下將反應(yīng)孵育30至60分鐘。
使用熒光板讀數(shù)器在激發(fā)= 530-570 nm，發(fā)射= 590-600 nm（*Ex / Em = 540/590 nm，截止= 570 nm）下監(jiān)控?zé)晒鈴?qiáng)度。注意：該板的內(nèi)容物也可以轉(zhuǎn)移到白色的透明底板上，并通過吸光度酶標(biāo)儀在576±5 nm的波長(zhǎng)下讀取。與熒光讀數(shù)相比，吸收檢測(cè)的靈敏度較低。
11301 Amplite™熒光法髓過氧化物酶檢測(cè)試劑盒 *紅色熒光* Amplite™ Fluorimetric Myeloperoxidase Assay Kit *Red Fluorescence* 1 kit 11302 Amplite™熒光法guansuan氧化酶檢測(cè)試劑盒 *紅色熒光* Amplite™ Fluorimetric Glutamate Oxidase Assay Kit *Red Fluorescence* 1 kit 11303 Amplite™熒光法單胺氧化酶檢測(cè)試劑盒 *紅色熒光* Amplite™ Fluorimetric Monoamine Oxidase Assay Kit *Red Fluorescence* 1 kit 11304 Amplite™熒光法huangpiaoling氧化酶檢測(cè)試劑盒 *紅色熒光* Amplite™ Fluorimetric Xanthine Oxidase Assay Kit *Red Fluorescence* 1 kit
