監(jiān)測(cè)生物樣品中還原型和氧化型guguanggantai（GSH）對(duì)于評(píng)估細(xì)胞和組織的氧化還原和解毒狀態(tài)與guguanggantai對(duì)氧化和自由基介導(dǎo)的細(xì)胞損傷的保護(hù)作用有關(guān)至關(guān)重要。半guangansuan代謝疾病包括guangansuan病，一種由溶酶體運(yùn)輸缺陷引起的常染色體隱性遺傳疾病，以及guangansuan尿癥，一種常見(jiàn)的遺傳性氨基酸運(yùn)輸疾病。半guangansuan在蛋白質(zhì)中發(fā)現(xiàn)的氨基酸中是*的。有幾種試劑或測(cè)定試劑盒可用于定量生物系統(tǒng)中的硫醇。但是，所有的商用套件要么靈敏度低下，要么協(xié)議繁瑣。我們的Amplite™熒光guguanggantai定量試劑盒提供了超靈敏的熒光測(cè)定法，可定量樣品中的GSH。該試劑盒使用專(zhuān)有的非熒光染料，該染料與硫醇反應(yīng)后會(huì)發(fā)出強(qiáng)烈的熒光。該試劑盒提供了一種靈敏的一步熒光法，可在100 µL的檢測(cè)體積中檢測(cè)出少至1個(gè)picomole的半guangansuan或GSH。該測(cè)定可以以方便的96孔或384孔微量滴定板形式進(jìn)行，無(wú)需分離步驟即可輕松實(shí)現(xiàn)自動(dòng)化。使用熒光酶標(biāo)儀可以輕松讀取其信號(hào)。

1. 準(zhǔn)備GSH工作溶液（50 µL）

2. 添加GSH標(biāo)準(zhǔn)品或測(cè)試樣品（50 µL）

3. 在室溫下孵育10至60分鐘

4. 監(jiān)視Ex / Em = 490/525 nm（截止= 515 nm）處的熒光增加

重要說(shuō)明
開(kāi)始實(shí)驗(yàn)之前，請(qǐng)?jiān)谑覝叵陆鈨鏊性噭┖薪M件。

儲(chǔ)備溶液的制備

除非另有說(shuō)明，否則所有未使用的儲(chǔ)備溶液應(yīng)分為一次性使用的等分試樣，并在制備后儲(chǔ)存在-20°C下。避免重復(fù)凍融循環(huán)。

1. GSH標(biāo)準(zhǔn)溶液（1 mM）：
將200 µL測(cè)定緩沖液（組分B）加到GSH標(biāo)準(zhǔn)溶液（組分C）小瓶中，制成1 mM（1 nmol / µL）GSH標(biāo)準(zhǔn)溶液。

2. Thiolite™Green儲(chǔ)備溶液（100X）：
將100 µL DMSO（組分D）添加到Thiolite™Green（組分A）小瓶中，制成100X Thiolite™Green儲(chǔ)備溶液。

配制標(biāo)準(zhǔn)溶液

為了方便起見(jiàn)，請(qǐng)使用我們的系列稀釋計(jì)

將30μL的1 mM（1 nmol / µL）GSH標(biāo)準(zhǔn)溶液添加到970μL的測(cè)定緩沖液（組分B）中，以生成30μM（30 pmol / µL）GSH標(biāo)準(zhǔn)溶液。取30μM（30 pmol / µL）GSH標(biāo)準(zhǔn)溶液并進(jìn)行1：3連續(xù)稀釋?zhuān)允褂脺y(cè)定緩沖液（組分B）獲得系列稀釋的GSH標(biāo)準(zhǔn)（SD7-SD1）。 注意：稀釋的GSH標(biāo)準(zhǔn)溶液不穩(wěn)定。4小時(shí)內(nèi)使用。

準(zhǔn)備工作溶液

將50μL的100X Thiolite™Green儲(chǔ)備溶液添加到5 mL的測(cè)定緩沖液（組分B）中，并充分混合以制成GSH工作溶液。