近年來，源自細(xì)胞膜脂質(zhì)過氧化的醛的形成，反應(yīng)性和毒性受到了極大的關(guān)注。醛的快速準(zhǔn)確測(cè)量是生物學(xué)研究，化學(xué)研究，食品工業(yè)和環(huán)境污染監(jiān)測(cè)的重要任務(wù)。有幾種試劑或測(cè)定試劑盒可用于定量醛的數(shù)量?，F(xiàn)有的大多數(shù)醛測(cè)試方法都基于通過繁瑣而昂貴的HPLC-MS或GC-MS進(jìn)行的分離。我們的Amplite™比色醛定量試劑盒（10051）和Amplite™熒光醛定量試劑盒（10052）均用于定量較高pH下的醛。試劑盒10052使用專有的熒光染料，該染料與醛反應(yīng)后會(huì)產(chǎn)生強(qiáng)熒光產(chǎn)物。試劑盒10052比試劑盒10051靈敏得多。該熒光試劑盒提供了靈敏的混合讀取方法，可在100 µL的測(cè)定體積（1 µM）中檢測(cè)低至0.1納摩爾的醛。該測(cè)定可以以方便的96孔或384孔微量滴定板形式進(jìn)行，無需分離步驟即可輕松實(shí)現(xiàn)自動(dòng)化。熒光酶標(biāo)儀可輕松讀取其信號(hào)。

協(xié)議摘要

1. 準(zhǔn)備醛標(biāo)準(zhǔn)品和/或測(cè)試樣品（50 µL）
2. 添加AldeLight™Blue工作溶液（50 µL）
3. 在室溫下孵育15至30分鐘
4. 加入25 µL反應(yīng)緩沖液
5. 監(jiān)測(cè)Ex / Em = 365/435 nm時(shí)的熒光增加

重要說明
在開始實(shí)驗(yàn)之前，將所有套件組件解凍至室溫。

儲(chǔ)備溶液的制備

除非另有說明，否則所有未使用的儲(chǔ)備溶液應(yīng)分為一次性使用的等分試樣，并在制備后儲(chǔ)存在-20°C下。避免重復(fù)凍融循環(huán)。

1. AldeLight™藍(lán)色儲(chǔ)備溶液（250X）：
將40 µL DMSO（組分E）加入小瓶AldeLight™藍(lán)色（組分A）中，制成250X AldeLight™藍(lán)色儲(chǔ)備溶液。

2.醛標(biāo)準(zhǔn)溶液（10 mM）：
將1 mL測(cè)定緩沖液（組分B）添加到醛標(biāo)準(zhǔn)溶液（組分D）小瓶中，制成10 mM醛標(biāo)準(zhǔn)溶液。

配制標(biāo)準(zhǔn)溶液

為了方便起見，請(qǐng)使用我們的系列稀釋計(jì)

取10 mM醛標(biāo)準(zhǔn)溶液并進(jìn)行1:10稀釋，以獲得1000 uM醛標(biāo)準(zhǔn)溶液（AS7）。然后進(jìn)行1：3系列稀釋，以得到剩余的醛標(biāo)準(zhǔn)品（AS6-AS1）。

準(zhǔn)備工作溶液

將20μL250X AldeLight™Blue儲(chǔ)備溶液添加到5 mL的測(cè)定緩沖液（組分B）中，并充分混合以制成AldeLight™Blue工作溶液。注意： 5 mL AldeLight™Blue工作溶液足以裝滿一塊板。反應(yīng)混合物不穩(wěn)定，在2小時(shí)內(nèi)使用。

程序

表1. 黑色96孔微孔板中醛標(biāo)準(zhǔn)品和測(cè)試樣品的布局。AS =醛標(biāo)準(zhǔn)品（AS1-AS7，1至1000 µM）；BL =空白對(duì)照；TS =測(cè)試樣品。

表2.  每個(gè)孔的試劑組成。

1. 根據(jù)表1和2中提供的布局，準(zhǔn)備醛標(biāo)準(zhǔn)品（AS），空白對(duì)照（BL）和測(cè)試樣品（TS）。對(duì)于384孔板，每孔使用25 µL試劑代替50 µL。
    
2. 在醛標(biāo)準(zhǔn)品，空白對(duì)照和測(cè)試樣品的每個(gè)孔中添加50 µL AldeLight™Blue工作溶液，以使總?cè)y(cè)定體積為100 µL /孔。對(duì)于384孔板，向每個(gè)孔中添加25 µL AldeLight™Blue工作溶液，總體積為50 µL /孔。
    
3. 在避光的條件下，將反應(yīng)混合物在室溫下孵育15至30分鐘。
    
4. 在每個(gè)孔中加入25 µL反應(yīng)緩沖液（組分C）。
    
5. 使用熒光板讀數(shù)器監(jiān)測(cè)Ex / Em = 365/435 nm處的熒光增加。