myPOLS Biotec正在開發(fā)新一代的DNA聚合酶

       myPOLS Biotec是一家來自康斯坦茨大學(xué)的生物技術(shù)公司，來自Andreas Marx教授的研究小組。憑借我們?cè)诟咄緿NA聚合酶設(shè)計(jì)方面的專業(yè)知識(shí)，我們?yōu)槟膽?yīng)用定制酶。

       研發(fā)活動(dòng)包括：

       改進(jìn)的DNA聚合酶用于SNP檢測(cè)和甲基化特異性PCR。

       病原體檢測(cè)分析，例如用于流感和諾如病毒診斷。

       具有逆轉(zhuǎn)錄酶活性的熱穩(wěn)定DNA聚合酶。

       抑制劑抗性聚合酶，用于從樣品中直接PCR，如全血，唾液，細(xì)菌，細(xì)胞 - 顆粒，植物等。

Isotherm2G DNA聚合酶

myPOLS Biotec正在開發(fā)新一代的DNA聚合酶

用于和可靠的應(yīng)用，例如個(gè)性化醫(yī)療，病原體檢測(cè)，DNA和RNA診斷，法醫(yī)學(xué)等等。

Isotherm2G DNA聚合酶

       是一種嗜溫性DNA聚合酶，非常適合等溫?cái)U(kuò)增。它可以從具有高鏈置換活性的DNA和RNA模板合成DNA。Isotherm2G已被突變，以提高反轉(zhuǎn)錄活性。在55-70°C之間活躍。Isotherm2G DNA聚合酶是等溫?cái)U(kuò)增反應(yīng)的優(yōu)先選擇，如環(huán)介導(dǎo)的等溫?cái)U(kuò)增（LAMP），鏈置換擴(kuò)增（SDA），滾環(huán)擴(kuò)增（RCA），分枝擴(kuò)增（RAM），基因組擴(kuò)增等。Isotherm2G DNA聚合酶以8 U / µl含甘油溶液的形式提供。它與足夠量的10x反應(yīng)緩沖液一起使用，該緩沖液已針對(duì)等溫?cái)U(kuò)增進(jìn)行了優(yōu)化。緩沖液中含3.25 mM鎂離子，終濃度為1x。鎂，引物和dNTPs的宜濃度在很大程度上取決于所應(yīng)用的應(yīng)用，應(yīng)該對(duì)其進(jìn)行優(yōu)化。

Volcano2G DNA聚合酶

       Volcano 2G是原始Volcano DNA聚合酶的高級(jí)版本，具有進(jìn)一步改善的逆轉(zhuǎn)錄活性。該酶是一種經(jīng)過工程改造的，極耐熱的逆轉(zhuǎn)錄酶和組合的DNA聚合酶，可通過定向的人工進(jìn)化獲得。Volcano2G DNA聚合酶可直接從RNA模板（無需等溫逆轉(zhuǎn)錄步驟）直接促進(jìn)“零步驟" RT-PCR，因?yàn)槟孓D(zhuǎn)錄與循環(huán)PCR延伸步驟中的DNA擴(kuò)增同時(shí)進(jìn)行。這也允許在高溫下進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)，從而將在高溫下融化的RNA中強(qiáng)大的二級(jí)結(jié)構(gòu)所遇到的問題降至低。 

       Volcano2G DNA聚合酶包含熱啟動(dòng)劑配制的，具有逆轉(zhuǎn)錄酶活性的工程穩(wěn)定的熱穩(wěn)定DNA聚合酶和穩(wěn)健的Taq DNA聚合酶的酶混合物。基于適體的熱啟動(dòng)劑設(shè)計(jì)用于在低溫下（例如，在移取反應(yīng)混合物時(shí)）阻斷非特異性DNA聚合酶活性，但會(huì)在高于50-55°C的溫度下分解，從而釋放出現(xiàn)已*活化的DNA聚合酶。

       Volcano2G DNA聚酶作為5 U / µl甘油庫存與適當(dāng)?shù)?x Volcano反應(yīng)緩沖液一起運(yùn)輸，該緩沖液針對(duì)60-300 bp的擴(kuò)增子進(jìn)行了優(yōu)化。Volcano2G逆轉(zhuǎn)錄酶可以可靠地從≥1 ng的總RNA輸入中檢測(cè)RNA靶標(biāo)。它不需要Mn 2+即可  獲得宜活性。但是，可以通過向反應(yīng)中添加Mn 2+來進(jìn)一步優(yōu)化某些檢測(cè)方法（建議范圍是0.5-1 mM，未提供Mn 2+）。

       RT-PCR活性：已對(duì) Volcano3G RT-PCR Mix進(jìn)行了成功的RT-PCR性能測(cè)試。在實(shí)時(shí)PCR循環(huán)儀中從人總RNA提取物中擴(kuò)增出151 bp片段（HPRT1 mRNA），并可視化為單個(gè)擴(kuò)增產(chǎn)物。

      DNA聚合酶活性：使用人工DNA模板和DNA引物監(jiān)控Volcano3G DNA聚合酶活性并將其調(diào)整為特定的DNA聚合酶活性。
酶濃度由蛋白質(zhì)特異性染色確定。
帶有“ 0步"方案的便捷RT-PCR零步協(xié)議節(jié)省時(shí)間
      跳過逆轉(zhuǎn)錄步驟。不需要等溫逆轉(zhuǎn)錄步驟。 
      Volcano2G是一種具有PCR活性的逆轉(zhuǎn)錄酶，非常穩(wěn)定，在95°C下的半衰期> 40分鐘。

靈敏的RNA檢測(cè)      當(dāng)添加實(shí)時(shí)PCR染料時(shí)，Volcano2G DNA聚合酶也可用于實(shí)時(shí)PCR。Volcano2G具有Taq DNA聚合酶樣核酸酶結(jié)構(gòu)域，使其也適用于基于水解探針的分析。如此處所示，通過使用基于探針的qPCR分析和零步RT-PCR方案，使用總RNA的10倍稀釋系列檢測(cè)了NONO mRNA。來自細(xì)胞的直接RT-PCR      對(duì)于細(xì)胞RNA的可靠RT-PCR，樣品制備步驟*。然而，這些步驟費(fèi)力，費(fèi)時(shí)并且需要額外的消耗品。使用我們的VolcanoCell2G RT-PCR 2x預(yù)混液，您可以用快速便捷的“零步長"方案代替費(fèi)力的RNA制備。節(jié)省時(shí)間和金錢      VolcanoCell2G RT-PCR 2x預(yù)混液具有簡(jiǎn)化的“零步驟"工作流程，使您可以規(guī)避費(fèi)力的純化和提取步驟，從而節(jié)省了時(shí)間和金錢。

出色的靈敏度     

 VolcanoCell2G RT-PCR 2x實(shí)現(xiàn)了低至單個(gè)細(xì)胞的檢測(cè)靈敏度。在此示例中，按照VolcanoCell2G協(xié)議從單個(gè)隆德人中腦（LUHMES）細(xì)胞中檢測(cè)到GAPDH mRNA。Isotherm2G DNA polymerase      Isotherm2G DNA聚合酶是一種嗜溫DNA聚合酶，它從DNA和RNA模板合成DNA，具有高鏈置換活性。Isotherm2G是原始Isotherm DNA聚合酶的下一代，具有進(jìn)一步改善的逆轉(zhuǎn)錄活性。宜溫度（55-70°C）使Isotherm2G DNA聚合酶成為等溫?cái)U(kuò)增反應(yīng)的優(yōu)先選擇，如環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增（LAMP），鏈置換擴(kuò)增（SDA），滾環(huán)擴(kuò)增（RCA），衍生物擴(kuò)增（RAM），基因組擴(kuò)增等。＃8801S Isotherm2G DNA聚合酶 1600 U，8U /μl，200μl＃8801M Isotherm2G DNA聚合酶 8000 U，8U /μl，1000μl就是這么簡(jiǎn)單：只需在59°C溫育30分鐘，就可以使用LAMP方法擴(kuò)增DNA目標(biāo)（紅色曲線）和RNA目標(biāo)（藍(lán)色曲線）。Isotherm可用于RCA，SDA，RAM，LAMP和許多其他放大技術(shù)。      Isotherm DNA聚合酶也具有非常好的逆轉(zhuǎn)錄活性。擴(kuò)增后，可以進(jìn)行熔解曲線測(cè)量以確認(rèn)特定產(chǎn)物的產(chǎn)生。因此可以進(jìn)行DNA和RNA檢測(cè)，從而實(shí)現(xiàn)簡(jiǎn)單的反應(yīng)設(shè)置，快速的反應(yīng)時(shí)間和閉管系統(tǒng)。應(yīng)用• 快速，等溫檢測(cè)和鑒定DNA和RNA靶標(biāo)• 逆轉(zhuǎn)錄• 實(shí)時(shí)等溫檢測(cè)• LAMP，SDA，RCA，RAMP• 入門擴(kuò)展反應(yīng)設(shè)置零件 卷 終濃度底漆混合物（各種濃度） 各種μl 各個(gè)dNTPs（10 mM） 1μl 400μM10 x Isotherm2G反應(yīng)緩沖液 2.5μl 1X等溫線DNA聚合酶8 U /μl 1μl 8 U /反應(yīng)模板/樣品提取物 各種μl 各個(gè)不含核酸酶的水 總反應(yīng)體積高達(dá)25μl  將所有組件保存在冰上。在使用前仔細(xì)旋轉(zhuǎn)并混合所有溶液。 引物混合物和濃度很大程度上取決于所采用的等溫反應(yīng)方法。Isotherm2G和Isotherm2G反應(yīng)緩沖液不含熒光染料。對(duì)于實(shí)時(shí)測(cè)量，請(qǐng)?zhí)砑舆m量的合適染料。詳細(xì)的產(chǎn)品說明內(nèi)容Isotherm DNA聚合酶以含有甘油的8U /μl溶液形式提供。它配有針對(duì)等溫?cái)U(kuò)增優(yōu)化的10倍反應(yīng)緩沖液。質(zhì)量控制DNA聚合酶活性：使用人工DNA模板和DNA引物監(jiān)測(cè)等溫線活性并將其調(diào)整為特定的DNA聚合酶活性。通過蛋白質(zhì)特異性染色確定酶濃度。有關(guān)批次特定濃度，請(qǐng)通過info@mypols.de查詢更多信息。 法律信息某些等溫?cái)U(kuò)增方法可能受到保護(hù)。購買此產(chǎn)品不會(huì)向購買者傳達(dá)使用所購產(chǎn)品進(jìn)行任何商業(yè)目的的任何等溫?cái)U(kuò)增方法的合法權(quán)利。存儲(chǔ)本產(chǎn)品采用冷藏包裝。請(qǐng)?jiān)诘诌_(dá)-20°C時(shí)存放產(chǎn)品。