RPA（恒溫?cái)U(kuò)增）技術(shù)應(yīng)用于腫瘤基因檢測(cè)

腫瘤基因相關(guān)基因檢測(cè)在癌癥早期診斷中意義重大。目前的檢測(cè)金標(biāo)準(zhǔn)為PCR和基因測(cè)序技術(shù)，而這些技術(shù)大多需要精密的儀器和復(fù)雜的試驗(yàn)流程，專業(yè)的實(shí)驗(yàn)人員配置。在現(xiàn)有的分子診斷技術(shù)中，以RPA為代表的核酸等溫?cái)U(kuò)增技術(shù)以其快速，靈敏，無(wú)需儀器等特點(diǎn)，使突破以上壁壘成為可能。

近日，大連醫(yī)科大學(xué)劉元斌課題組發(fā)明一種無(wú)需任何儀器，實(shí)現(xiàn)快速檢測(cè)突變基因并肉眼識(shí)別的新方法，被稱為AS-RPA-PNA-SYBR (ARPS) system。該方法以RPA（重組酶聚合酶恒溫?cái)U(kuò)增技術(shù)）為基礎(chǔ)，加之PNA技術(shù)（肽核酸類似物），并利用SYBR Green I核酸染料法顯色，肉眼即可判斷核酸擴(kuò)增與否。

文章中，作者比較了在PCR，測(cè)序以及ARSP在非小細(xì)胞肺癌中EGFR突變檢測(cè)應(yīng)用，發(fā)現(xiàn)在非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞系中，5分鐘便能檢測(cè)到EGFR 19Del(2)缺失突變，10分鐘檢測(cè)EGFRL SNP 突變，實(shí)現(xiàn)肉眼快速判斷（圖1），并在組織樣本中同樣得到驗(yàn)證（圖2）。

同樣，10到20分鐘之內(nèi)成功檢測(cè)到EGFR點(diǎn)突變。與傳統(tǒng)的DNA測(cè)序方法相比較，ARPS有著許多優(yōu)勢(shì)之處，包括時(shí)間短，成本低，操作簡(jiǎn)單，無(wú)需精密儀器等，而且，在基因組DNA樣本中，ARPS可以檢測(cè)到30%和40%的靶向突變位點(diǎn)，靈敏度與測(cè)序相當(dāng)（圖3）。之前有文章報(bào)道稱，RPA技術(shù)與末端熒光檢測(cè)和膠體金側(cè)流試紙條以及微流控芯片結(jié)合檢測(cè)EGFR突變，但還沒有類似ARSP肉眼觀測(cè)法的應(yīng)用。

然而，ARSP法同樣有待于進(jìn)一步優(yōu)化。比如，對(duì)于每一次EGFR檢測(cè)來(lái)說(shuō)，檢測(cè)靈敏性和特異性都還有待提高；由于樣本量有限，現(xiàn)仍需更多的臨床樣本實(shí)驗(yàn)進(jìn)行驗(yàn)證。無(wú)論如何，在jing準(zhǔn)醫(yī)療大背景下，對(duì)于一些沒有條件購(gòu)買測(cè)序儀，以及不具備專業(yè)操作能力的不發(fā)達(dá)地區(qū)和國(guó)家，這種快速簡(jiǎn)便，操作簡(jiǎn)單的，無(wú)需任何儀器的ARSP基因檢測(cè)法無(wú)疑為癌癥基因檢測(cè)提供有效參考，同時(shí)也為分子即時(shí)診斷領(lǐng)域（POCT）提供新的潛在解決方案。

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運(yùn)用安普未來(lái)開發(fā)的核酸恒溫?cái)U(kuò)增試劑盒RNA恒溫快速擴(kuò)增試劑盒（熒光型）并利用SYBR Green I核酸染料法顯色，肉眼就可以看出有無(wú)擴(kuò)增。