溶酶體

溶酶體為單層膜蛋白包圍的內(nèi)含一系列酸性水解酶的小體。溶酶體中含有多種酶，如糖苷酶、酸性磷酸酶、彈性蛋白酶、組織蛋白酶等等，是物質(zhì)代謝的場(chǎng)所。

弱堿性胺選擇性聚集在胞內(nèi)低pH值的小室中，可用于研究溶酶體的生物合成和發(fā)病機(jī)理。其中的就是DAMP，它不發(fā)熒光，需要和抗DNP的抗體共同使用，來觀察染色模式。中性紅、吖啶橙等熒光探針也常用于酸性細(xì)胞器的染色，不過它們?nèi)狈μ禺愋浴?/p>

LysoTracker探針就是Invitrogen開發(fā)的向酸性熒光探針，用于標(biāo)記和追蹤活細(xì)胞中的酸性細(xì)胞器。這些探針有幾個(gè)重要的特征：對(duì)酸性細(xì)胞器的高選擇性，在納摩爾濃度下能對(duì)活細(xì)胞有效標(biāo)記。而且，LysoTracker探針有幾種不同的顏色，適合多色標(biāo)記。

LysoTracker探針是細(xì)胞膜通透性的，一般聚集在球形的細(xì)胞器中。研究人員發(fā)現(xiàn)探針在極低濃度（～50 nM）下選擇性最佳。此外，較大的酸性細(xì)胞器在LysoTracker Red DND-99染色后，經(jīng)過甲醛固定仍保留其染色模式。

對(duì)于那些想研究溶酶體生物發(fā)生動(dòng)力學(xué)的研究人員來說，LysoSensor探針可謂量身定做。LysoSensor染料是向酸性的探針，由于質(zhì)子化作用聚集在酸性細(xì)胞器中。質(zhì)子化也緩解了染料的熒光淬滅，使熒光強(qiáng)度增加。因此，LysoSensor在酸化的環(huán)境中表現(xiàn)出pH依賴的熒光強(qiáng)度增加，而LysoTracker探針的熒光則沒有明顯變化。

Invitrogen提供了5種LysoSensor試劑，pKa不同，顏色各異。LysoSensor Blue DND-167和LysoSensor Green DND-189的pKa值很低，處于酸性環(huán)境中才會(huì)發(fā)出熒光，而LysoSensor Green DND-153在中性pH下就發(fā)出很強(qiáng)的熒光。LysoSensor Yellow/Blue DND-160很特別，具有雙激發(fā)和雙發(fā)射峰，是pH依賴的。在酸性細(xì)胞器中，它主要發(fā)黃色熒光，而在弱酸性細(xì)胞器中，熒光則為藍(lán)色。LysoSensor Yellow/Blue DND-160曾與fluo-3 AM共用，來同時(shí)測(cè)量兔胃腺中H+ 和Ca2+，以確定類和cAMP依賴通路激活后胃酸分泌的動(dòng)力學(xué)。

除了上面這些傳統(tǒng)的熒光探針，Invitrogen的Organelle Lights?熒光蛋白也是一個(gè)不錯(cuò)的選擇。Organelle Lights是即用型的熒光蛋白載體，融合了信號(hào)肽，能將表達(dá)的熒光蛋白定位到亞細(xì)胞器中，如核、質(zhì)膜、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)、高爾基體和過氧化物酶體等等。顏色有青、綠、橙、紅幾種。它通過改造的可用于哺乳動(dòng)物細(xì)胞的桿狀病毒（BacMam virus）將熒光蛋白導(dǎo)入胞內(nèi)，不僅安全，而且適合多種細(xì)胞類型，包括原代細(xì)胞和神經(jīng)細(xì)胞。你只需要將試劑加到細(xì)胞中就行了，既不需要轉(zhuǎn)染，也不需要對(duì)細(xì)胞做任何處理，用起來相當(dāng)方便。

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注：探針標(biāo)記細(xì)胞后，只能用熒光顯微鏡觀察，而不能用流式或熒光酶標(biāo)儀檢測(cè)，因?yàn)樵诳偧?xì)胞熒光中溶酶體熒光只占非常小的比例。