中文名：人內(nèi)分泌腺來源的血管內(nèi)皮生長因子試劑盒
英文名：Human Endocrine gland vascular endothelial growth factor,EG-VEGF Elisa Kit
別名：人內(nèi)分泌腺來源的血管內(nèi)皮生長因子(EG-VEGF)ELISA Kit
供應(yīng)商：博研生物
規(guī)格：48t/96t
保存：2-8℃
有效期：6個月
用途：用于測定血清，血漿及相關(guān)液體樣本中相關(guān)含量或活性。
特點：敏感性高、特異性強(qiáng)、重復(fù)性好、試劑穩(wěn)定、易保存，操作簡便。
預(yù)期應(yīng)用：ELISA法定量測定人血清、血漿、細(xì)胞培養(yǎng)上清或其它相關(guān)生物液體中EG-VEGF含量。
檢測目的:用于測定血清，血漿及相關(guān)液體等樣本，例如適合檢測包括血清、血漿、尿液、胸腹水、灌洗液、腦脊液、細(xì)胞培養(yǎng)上清、組織勻漿等標(biāo)本。
ELISA方法被廣泛應(yīng)用于各種抗原和抗體測定。但ELISA測定中影響因素較多，而且其操作中有一定的技術(shù)要求，在檢測過程中除正常反應(yīng)外，有時常見到一些錯誤的結(jié)果。
引起ELISA測定錯誤結(jié)果的原因主要有：
①標(biāo)本因素；
②試劑因素；
③操作因素。
操作步驟：
1，試劑應(yīng)按標(biāo)簽說明書儲存，使用前恢復(fù)到室溫。
2，實驗中不用的板條應(yīng)立即放回包裝袋中，密封保存，以免變質(zhì)。
3，不用的其它試劑應(yīng)包裝好或蓋好。
4，使用一次性的吸頭以免交叉污染，避免使用帶金屬部分的加樣器。
5，使用干凈的塑料容器配置洗滌液。使用前充分混勻試劑盒里的各種成份及樣品。
6，洗滌酶標(biāo)板時應(yīng)充分拍干，不要將吸水紙直接放入酶標(biāo)反應(yīng)孔中吸水。
7，避免長時間打開蓋子。底物B對光敏感，避免長時間暴露于光下。
8，嚴(yán)格按照說明書的操作方法進(jìn)行操作。說明書以英文說明書為主。
人內(nèi)分泌腺來源的血管內(nèi)皮生長因子試劑盒標(biāo)本的采集及保存:
1. 血清：全血標(biāo)本請于室溫放置2小時或4℃ 后于1000 x g離心20分鐘，取上清即可檢測，或?qū)?biāo)本放于-20℃或-80℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。
2. 血漿：可用EDTA或肝素作為抗凝劑，標(biāo)本采集后30分鐘內(nèi)于2 - 8° C 1000 x g離心15分鐘，或?qū)?biāo)本放于-20℃或-80℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。
3. 細(xì)胞培養(yǎng)物上清或其它生物標(biāo)本：1000 x g離心20分鐘，取上清即可檢測，或?qū)?biāo)本放于-20℃或-80℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。
注：標(biāo)本溶血會影響后檢測結(jié)果，因此溶血標(biāo)本不宜進(jìn)行此項檢測。
實驗準(zhǔn)備：
1. ELISA試劑盒及待測樣本
2. 酶標(biāo)儀(450nm波長濾光片)
3. 高精度移液器，EP管及一次性吸頭
4. 37℃恒溫箱，雙蒸水或去離子水
5. 吸水紙
優(yōu)雙抗體夾心法(檢測未知抗原)：
1、用緩沖液將抗體稀釋至1-10ug/ml。在反應(yīng)孔中加0.1ml，4℃ 過夜。次日，棄去孔內(nèi)溶液，用洗滌緩沖液洗3次。
2、加樣：加一定稀釋的待檢樣品0.05ml于上述已包被之反應(yīng)孔中，置37℃ 孵育1小時。然后洗滌(同時做空白孔，陰性對照孔及陽性對照孔)。
3、加酶標(biāo)抗體：于各反應(yīng)孔中，加入新鮮稀釋的酶標(biāo)抗體(經(jīng)滴定后的稀釋度)0.05ml。37℃ 孵育0.5～1小時，洗滌。
4、加底物液顯色：于各反應(yīng)孔中加入臨時配制的TMB底物溶液0.1ml，37℃ 10～30分鐘。
5、終止反應(yīng)：于各反應(yīng)孔中加入2M硫酸0.05ml
6、結(jié)果判定：可于白色背景上，直接用肉眼觀察結(jié)果：反應(yīng)孔內(nèi)顏色越深，陽性程度越強(qiáng)，陰性反應(yīng)為無色或極淺，依據(jù)所呈顏色的深淺，以“+”、“-”號表示。也可測OD值：在ELISA檢測儀上，于450nm(若以ABTS顯色，則410nm)處，以空白對照孔調(diào)零后測各孔OD值，若大于規(guī)定的陰性對照OD值的2.1倍，即為陽性。
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試劑盒性能：
1.樣品線性回歸與預(yù)期濃度相關(guān)系數(shù)R 值為0.990 以上。
2.批內(nèi)與批見應(yīng)分別小于9%和11%。
