Applied Cell®Xeno-Free 人間.充質(zhì).干細(xì)胞.培養(yǎng)基（無酚紅）

產(chǎn)品基本信息

產(chǎn)品簡介

Xeno-Free 人間.充質(zhì).干細(xì)胞.培養(yǎng)基（無酚紅）是埃澤思生物（Applied Cell®）自主研發(fā)的一款無外源動(dòng)物

成分的人間.充質(zhì).干細(xì)胞.培養(yǎng)基。可應(yīng)用于人類骨.髓、脂肪、臍.帶等組織來源的間充質(zhì)干細(xì)胞的原代分離、擴(kuò)增與傳代培養(yǎng)，

并保持其多向分化潛能。本產(chǎn)品內(nèi)毒素水平遠(yuǎn)低于中國藥典標(biāo)準(zhǔn)，生產(chǎn)過程遵循ISO9001 體系,并符合 GMP 指導(dǎo)原則。

Xeno-Free 人間.充質(zhì).干細(xì)胞.培養(yǎng)基主要成分：氨基酸，維生素、無機(jī)鹽、白蛋白，轉(zhuǎn)鐵蛋白、胰島素、微量元素，細(xì)胞因子等。

產(chǎn)品特性

? 無外源動(dòng)物蛋白成分，大大降低各類病毒、霉菌和支原體等的污染風(fēng)險(xiǎn)。

? 全程無血清生產(chǎn)，極大降低批次間差異。

? 可用于原代分離，且培養(yǎng)過程無需包被培養(yǎng)板。

? 擴(kuò)增效率高，24h 左右增殖翻倍，節(jié)省培養(yǎng)時(shí)間。

? 內(nèi)毒素<0.06EU/ml，遠(yuǎn)低于中國藥典水

產(chǎn)品內(nèi)容

相關(guān)產(chǎn)品

無血清細(xì)胞凍存液（治.療級(jí)）（Applied Cell®: Cat. no.AC-1001006）

人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞（Applied Cell®: Cat. no.AC-2001003）

人脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞（Applied Cell®: Cat. no.AC-2001004）

細(xì)胞消化液（Applied Cell®: Cat. no. AC-1001024）

實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備

人間.充質(zhì).干細(xì)胞.培養(yǎng)基配制

1.1. 37℃快速解凍人間.充質(zhì)干.細(xì)胞.培養(yǎng)基添加劑，快速溶解時(shí)不易破壞添加劑中營養(yǎng)物質(zhì)，時(shí)間大致為 10min。

待添加劑融化后搖勻，分裝或直接按比例添加到基礎(chǔ)培養(yǎng)基中，分裝后添加劑立即儲(chǔ)存于-20℃至-80℃，避免反復(fù)凍融 。

1.2. 將添加劑以 10%比例加入到人間充質(zhì)干細(xì)胞基礎(chǔ)培養(yǎng)基中，混勻，即為人間.充質(zhì).干細(xì)胞.培養(yǎng)基

（AC-1001003PRF）?；旌虾笈囵B(yǎng)基可在 2-8℃ 穩(wěn)定儲(chǔ)存 2-3 周，不建議使用已配制超過 3周的培養(yǎng)基。

1.3. 人間.充質(zhì).干細(xì)胞.培養(yǎng)基可直接應(yīng)用于人類骨.髓、脂肪、臍帶等組織來源的間充質(zhì)干細(xì)胞的原代分離、擴(kuò)增與傳代培養(yǎng)。

操作方法(以下步驟皆應(yīng)在無菌條件下操作)

hMSC細(xì)胞復(fù)蘇(10cm dish)

1.1. 從液氮中取出凍存的 hMSC 細(xì)胞，迅速將凍存管放入 37℃水浴快速融解。

1.2. 在生物安全柜或超凈臺(tái)中，將解凍后的細(xì)胞懸液緩慢加入 5 mL 預(yù)溫的人間.充質(zhì).干細(xì)胞.培養(yǎng)基（AC-1001003PRF）。

1.3. 1200rpm 離心 3 min，吸掉上清，加入 10mL 人間.充質(zhì).干細(xì)胞.培養(yǎng)基重懸細(xì)胞。

1.4. 將細(xì)胞均勻鋪到培養(yǎng)皿中，水平十字振動(dòng)培養(yǎng)皿使細(xì)胞均勻分布，5% CO2 的 37℃恒溫細(xì)胞培

養(yǎng)箱中培養(yǎng) 24 小時(shí)后觀察細(xì)胞狀態(tài)。

1.5. 24h 后更換新鮮人間.充質(zhì).干細(xì)胞.培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)，每 2-3 天更換培養(yǎng)液。

hMSC細(xì)胞傳代培養(yǎng)

2.1. 在顯微鏡下觀察細(xì)胞，當(dāng)細(xì)胞融合度達(dá)到 90%，即可傳代。

2.2. 在超凈臺(tái)/安全柜中，吸掉原有培養(yǎng)基，加入 PBS 溶液清洗一次，加入細(xì)胞消化液（AC-1001024）使之完.全覆蓋皿/瓶底。

2.3. 室溫孵育 4-5 分鐘或 37℃孵育 2-4 分鐘，顯微鏡下觀察大部分細(xì)胞脫離皿底即停止消化。

2.4. 加入消化液 2 倍體積的人間.充質(zhì).干細(xì)胞.培養(yǎng)基，用移液器輕輕吹打瓶壁上未完.全脫離的細(xì)胞，并輕輕吹打混勻，使細(xì)胞完.全分散。

2.5. 將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移到 15 mL 離心管中，1200 rpm 離心 3 min。

2.6. 棄上清，加入人間.充質(zhì).干細(xì)胞.培養(yǎng)基，重懸細(xì)胞，計(jì)數(shù)。1：3-1：4 比例傳代，或按 1-2x104

cells/cm²傳代，均勻鋪在培養(yǎng)皿/瓶中，置于 37℃，5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

注意：細(xì)胞傳代所需的時(shí)間：2-4 天。5 代及之前的細(xì)胞，生長速度較快。5 代以后的細(xì)胞，生長速度稍緩。

hMSC細(xì)胞凍存

3.1. 細(xì)胞達(dá)到 90%匯合度， 吸掉原有培養(yǎng)基，PBS 清洗一次。

3.2. 加入細(xì)胞消化液（AC-1001024）使之完.全覆蓋皿/瓶底，室溫孵育 4-5min 或 37℃孵育 2-4min

分鐘，顯微鏡下觀察大部分細(xì)胞脫離皿底即停止消化。

3.3. 加入消化液 2 倍體積的人間.充質(zhì).干細(xì)胞.培養(yǎng)基，用移液槍輕輕吹打瓶壁上未完.全脫離的細(xì)胞，并輕輕吹打混勻，

使細(xì)胞完.全分散。

3.4. 將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移到 15 mL 離心管中，1200 rpm 離心 3 min，吸掉上清。

3.5. 加入適量無血清細(xì)胞凍存液（治.療級(jí)）（AC-1001006），調(diào)整細(xì)胞凍存密度在 1×106 cells/mL左右，

每支凍存管分裝 1.5-2ml。

3.6. 直接放入-80℃，24h 后轉(zhuǎn)入液氮中長期保存。

質(zhì)量控制