氧滅菌后對(duì)潔凈車(chē)間沉降菌的檢測(cè)":A:操作方法：對(duì)潔凈車(chē)間用食品廠臭氧機(jī)滅菌1小時(shí)后進(jìn)行沉降菌檢測(cè)
B:名稱(chēng)：潔凈區(qū)微生物檢測(cè)操作規(guī)程
C:關(guān)鍵詞：潔凈區(qū)、食品廠臭氧機(jī)、車(chē)間臭氧機(jī)、微生物檢測(cè)
D:目 的：尋得優(yōu)質(zhì)食品廠臭氧機(jī)、車(chē)間臭氧機(jī)廠家 并規(guī)范潔凈區(qū)微生物檢測(cè)
E:原理：臭氧滅菌技術(shù)
F:適用范圍：100級(jí)、1萬(wàn)、10萬(wàn)、30萬(wàn)級(jí)潔凈區(qū)環(huán)境。
1. 沉降菌檢測(cè)
1） 在萬(wàn)級(jí)潔凈區(qū)內(nèi)的關(guān)鍵操作點(diǎn)和潔凈室內(nèi)每周檢測(cè)一次沉降菌和浮游菌；在10萬(wàn)級(jí)潔凈區(qū)內(nèi)其檢測(cè)頻次為每月檢測(cè)一次。30萬(wàn)級(jí)每季度檢測(cè)一次沉降菌。
2） 由微生物檢測(cè)員按《養(yǎng)基的配制操作規(guī)程的要求配制肉湯瓊脂培養(yǎng)基，培養(yǎng)皿使用Φ90mm×15mm，于121℃濕熱滅菌20分鐘，取出備用。
3） 做好潔凈區(qū)消毒工作，開(kāi)啟潔凈區(qū)凈化空調(diào)系統(tǒng)，正常運(yùn)行不少于30分鐘；對(duì)單向流如100級(jí)的凈化工作臺(tái)和層流罩要在凈化系統(tǒng)運(yùn)行10min后開(kāi)始。
4） 靜態(tài)測(cè)試在除測(cè)試人員外，室內(nèi)無(wú)生產(chǎn)人員的情況下進(jìn)行，動(dòng)態(tài)測(cè)試在已處于正常生產(chǎn)狀態(tài)下進(jìn)行。
5） 采樣點(diǎn)布置選用對(duì)角線法，要求布置地面四個(gè)方向，工作線上左右，關(guān)鍵設(shè)備上放置一個(gè)。
6） 萬(wàn)級(jí)、10萬(wàn)級(jí)、30萬(wàn)級(jí)的*少采樣點(diǎn)數(shù)可按下表確定。
| 面積m2 | 潔凈度級(jí)別10000 | 100000/300000 |
| <10 | 2 | 2 |
| ≥10~<20 | 2 | 2 |
| ≥20~<40 | 2 | 2 |
| ≥40~<100 | 4 | 2 |
| ≥100~<200 | 10 | 3 |
在滿足*少測(cè)點(diǎn)數(shù)的同時(shí)，還宜滿足*少培養(yǎng)皿數(shù)，見(jiàn)下表
| 潔凈度級(jí)別 | 所需Φ90mm×15mm（以沉降0.5h） |
| 100 | 14 |
| 10000 | 2 |
| 100，000/300,000 | 2 |
7） 百級(jí)區(qū)只有凈化工作臺(tái)下的局部范圍，其面積小于10m2，因此百級(jí)區(qū)取樣點(diǎn)至少為3個(gè)。
8） 測(cè)試人員按潔凈室級(jí)別規(guī)定的程序更換潔凈服進(jìn)入潔凈區(qū)；靜態(tài)測(cè)試時(shí)，室內(nèi)人員不得多于2人。
9） 將制備好的肉湯瓊脂培養(yǎng)基按采樣點(diǎn)布點(diǎn)位置離地0.8～1.5m處放置，打開(kāi)培養(yǎng)皿蓋，暴露30分鐘，檢測(cè)人員及時(shí)填寫(xiě)記錄，記錄房間溫濕度，壓差及測(cè)試狀態(tài)。
10） 蓋好皿蓋，將培養(yǎng)皿倒置于恒溫培養(yǎng)箱內(nèi)，在30～35℃中培養(yǎng)48小時(shí)，并用3只培養(yǎng)皿作對(duì)照。
11） 用透射光于培養(yǎng)皿背面或正面仔細(xì)觀察平皿上所有菌落數(shù)，要注意菌落與培養(yǎng)基沉淀物的區(qū)別，然后用5～10倍放大鏡檢查有否遺漏。
12） 計(jì)算平均菌落數(shù) =（M1＋M2……＋Mn）／n，式中 M1：1號(hào)培養(yǎng)皿菌落數(shù)，M2：2號(hào)培養(yǎng)皿菌落數(shù)，n： 培養(yǎng)皿數(shù)。
13） 用平均菌落數(shù)判斷潔凈室空氣中的微生物， 潔凈區(qū)的平均菌落數(shù)（靜態(tài)測(cè)試）：100級(jí)≤1個(gè)/皿，萬(wàn)級(jí)≤3個(gè)／皿，10萬(wàn)級(jí)≤10個(gè)／皿，30萬(wàn)級(jí)≤15個(gè)／皿。
14） 如超過(guò)標(biāo)準(zhǔn)，則必須對(duì)此區(qū)域重新消毒，重新采樣兩次，測(cè)試結(jié)果均須合格；否則要向質(zhì)量管理部經(jīng)理通報(bào)，并采取相應(yīng)的措施。
15） 檢測(cè)人員必須向QA部門(mén)發(fā)“潔凈級(jí)別檢測(cè)記錄”，取樣和微生物培養(yǎng)及檢測(cè)人員均要在記錄上簽名，QA部門(mén)主管審核，記錄由質(zhì)量管理部保存三年。
2. 浮游菌檢測(cè)
1） 對(duì)萬(wàn)級(jí)和10萬(wàn)級(jí)潔凈區(qū)要進(jìn)行浮游菌的檢測(cè)，在萬(wàn)級(jí)區(qū)內(nèi)的關(guān)鍵操作點(diǎn)和潔凈室內(nèi)每周檢測(cè)一次，10萬(wàn)級(jí)潔凈區(qū)內(nèi)其檢測(cè)頻次為每月檢測(cè)一次。
2） 浮游菌取樣使用浮游菌采樣器，采樣器必須要有流量計(jì)和定時(shí)量，并按儀器的檢定周期，定期對(duì)儀器作檢定，以保證測(cè)試數(shù)據(jù)的可靠性。
3） 采樣器進(jìn)入被測(cè)房間前要先用消毒劑滅菌，用于100級(jí)潔凈室的采樣器是一直放在房間內(nèi)；采樣時(shí)使用規(guī)定為Φ150mm×15mm培養(yǎng)皿。
4） 由微生物檢測(cè)人員按《培養(yǎng)基的配制操作規(guī)程》的要求配制營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基，于121℃濕熱滅菌20分鐘，取出備用。
5） 浮游菌取樣與沉降菌一樣可分為靜態(tài)測(cè)試和動(dòng)態(tài)測(cè)試兩種狀態(tài)；各種潔凈度的采樣點(diǎn)數(shù)目和*小采樣量如下表所示。
浮游菌取樣點(diǎn)數(shù)目及*小采樣量
| 潔凈度級(jí)別 | 面積m2 | *少采樣點(diǎn) | *小采樣量（L/次） | 驗(yàn)證 監(jiān)測(cè) 驗(yàn)證 監(jiān)測(cè) |
| 100 | ＜10 | 3 | 1000 | 600 |
| 10000 | ＜40 | 2 | 500 | 400 |
| 100000 | ＜100 | 2 | 100 | 50 |
6） 采樣點(diǎn)布點(diǎn)位置離地0.8～1.5m處放置，送風(fēng)口測(cè)點(diǎn)位置離開(kāi)送風(fēng)面30cm左右；可在關(guān)鍵設(shè)備或關(guān)鍵工作活動(dòng)范圍增加測(cè)點(diǎn)；采樣點(diǎn)的布置與5）相同。
7） 對(duì)單向流如l00級(jí)凈化工作臺(tái)，測(cè)試要在凈化空調(diào)系統(tǒng)正常運(yùn)行不少于l0min后開(kāi)始；對(duì)非單向流，如緩沖室、培養(yǎng)室，測(cè)試要在凈化空調(diào)系統(tǒng)正常運(yùn)行不少于30min后開(kāi)始。
8） 采樣者必須穿戴與被測(cè)潔凈區(qū)域相應(yīng)的工作服，在轉(zhuǎn)盤(pán)上放入或調(diào)換培養(yǎng)皿前，雙手要用消毒劑消毒；培養(yǎng)皿表面必須嚴(yán)格消毒。
9） 采樣口及采樣管在使用前必須高溫滅菌，要用消毒劑消毒采樣器的盤(pán)，轉(zhuǎn)盤(pán)以及罩子的內(nèi)外面；對(duì)采樣管的外壁和內(nèi)壁進(jìn)行消毒后，要將管中的殘留液倒掉并晾干。
10） 儀器經(jīng)消毒后先不放入培養(yǎng)皿，先接通電源，啟動(dòng)真空抽氣泵抽氣不少于5min，使儀器中的殘余消毒劑蒸發(fā)。
11） 調(diào)好流量，轉(zhuǎn)盤(pán)轉(zhuǎn)速，已知采樣器的流量（L/min ），設(shè)定采樣時(shí)間（min），相乘即采樣量（L）；關(guān)閉真空泵。
12） 檢查每個(gè)培養(yǎng)皿的質(zhì)量，培養(yǎng)基及培養(yǎng)皿有變質(zhì)、破損或污染的不能使用，放入培養(yǎng)皿，蓋上蓋子后調(diào)節(jié)采樣器縫隙高度。
13） 對(duì)于單向流或逆風(fēng)口，采樣器采樣管口朝向應(yīng)正對(duì)氣流方向，對(duì)于非單向流采樣管口向上，布置采樣點(diǎn)時(shí)，至少應(yīng)離開(kāi)塵粒較集中的回風(fēng)口lm以上。
14） 除百級(jí)區(qū)外，在其他潔凈室采樣時(shí)，要在送風(fēng)口和關(guān)鍵部位各進(jìn)行一次采樣，每個(gè)采樣點(diǎn)只采樣一次。
15） 置采樣口于采樣點(diǎn)后，開(kāi)啟采樣器，采樣時(shí)，測(cè)試人員要站在采樣口的下風(fēng)側(cè)，靜態(tài)測(cè)試時(shí)，室內(nèi)人員不得多于2人。
16） 采樣結(jié)束后取出培養(yǎng)皿，蓋上皿蓋并編號(hào)，注意防止采樣管對(duì)樣本的污染；要用消毒劑噴射罩子的內(nèi)壁和轉(zhuǎn)盤(pán)，將采樣過(guò)程記錄在“潔凈級(jí)別檢測(cè)記錄”上。
17） 全部采樣結(jié)束后，將培養(yǎng)皿倒置于恒溫培養(yǎng)箱中30℃~35℃培養(yǎng)48h；每批培養(yǎng)基可選3只培養(yǎng)皿作對(duì)照培養(yǎng)，檢驗(yàn)培養(yǎng)基本身是否污染。
18） 用肉眼直接計(jì)數(shù)，標(biāo)記或菌落計(jì)數(shù)器上點(diǎn)計(jì)，然后用500倍放大鏡檢查，有否遺漏，若平板上有2個(gè)或2個(gè)以上的菌落重疊，可分辨時(shí)仍以2個(gè)或2個(gè)以上菌落計(jì)數(shù)。
19） 浮游菌評(píng)定標(biāo)準(zhǔn)：100級(jí)≤5/m3，萬(wàn)級(jí)≤100/m3，10萬(wàn)級(jí)≤500/m3
20） 微生物檢測(cè)人在“潔凈級(jí)別檢測(cè)記錄”上記錄檢測(cè)數(shù)據(jù)，并交QA部門(mén)主管審批，每個(gè)測(cè)點(diǎn)的浮游菌平均濃度必須低于設(shè)定的潔凈度標(biāo)準(zhǔn)的規(guī)定。
21） 若某測(cè)點(diǎn)的浮游菌平均濃度超過(guò)評(píng)定標(biāo)準(zhǔn)，則必須對(duì)此區(qū)域先行消毒，然后重新取樣兩次，兩次測(cè)試結(jié)果必須合格；否則要向質(zhì)量管理部經(jīng)理通報(bào)，并要采取相應(yīng)的措施。
車(chē)間凈化無(wú)菌級(jí)別請(qǐng)參照國(guó)家消毒標(biāo)準(zhǔn)。
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