| 上海宇淳生物科技有限公司
主營(yíng)產(chǎn)品： PCR八聯(lián)排管,sigma現(xiàn)貨,Cy7試劑 |
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| 參考價(jià) | ￥860 |
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-
品牌
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廠(chǎng)商性質(zhì)
經(jīng)銷(xiāo)商 -
所在地
上海市
| 96T | 860元 | 1 盒 可售 |
更新時(shí)間：2024-05-28 10:47:56瀏覽次數(shù)：222
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脯an酸脫氫酶(ProDH)試劑盒,微板法
脯an酸脫氫酶(ProDH)試劑盒,微板法
本試劑盒僅供科研使用 1 脯*酸脫氫酶（PDH）試劑盒說(shuō)明書(shū) （貨號(hào)：WS1011W 微板法 96 樣） 一、產(chǎn)品簡(jiǎn)介： 脯*酸脫氫酶(proline dehydragenase，PDH，EC 1.5.1.2) 催化脯*酸生成 Δ1-二氫吡咯- 5-羧酸的反應(yīng)，是脯*酸降解過(guò)程的限速步驟。脯*酸是分布zui廣泛的一種滲透物質(zhì)，在脅 迫條件下很多植物可以通過(guò)增加合成、減少降解而在體內(nèi)累積大量脯*酸，降低 PDH 活性 對(duì)于防止?jié)B透脅迫對(duì)植物造成傷害、保護(hù)細(xì)胞結(jié)構(gòu)等方面具有重要意義。 脯*酸脫氫酶(PDH)催化脯*酸脫氫并使 NAD+還原成 NADH，通過(guò)檢測(cè) NADH 在340nm 處的增加速率即可得出 PDH 酶活性大小。 二、試劑盒的組成和配制： 試劑名稱(chēng) 規(guī)格 保存要求 備注 提取液 液體 100mL×1 瓶 4℃保存 試劑一 粉體 mg×1 支 4℃保存 臨用前甩幾下，使粉體落到底部， 再加入 1.1mL 蒸餾水溶解備用 試劑二 液體 15mL×1 瓶 4℃保存 試劑三 粉體 mg×1 支 4℃保存 臨用前甩幾下，使粉體落到底部， 再加入 1.1mL 蒸餾水溶解備用 三、所需的儀器和用品： 酶標(biāo)儀、96 孔板、臺(tái)式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、研缽、冰和蒸餾水。 四、脯*酸脫氫酶（PDH）活性測(cè)定： 建議正式實(shí)驗(yàn)前選取 2 個(gè)樣本做預(yù)測(cè)定，了解本批樣品情況，熟悉實(shí)驗(yàn)流程，避免實(shí)驗(yàn) 樣本和試劑浪費(fèi)！ 1、樣本制備： 稱(chēng)取約 0.1g 組織樣本，加入 1mL 提取液，冰浴勻漿，12000rpm，4℃離心 10min， 取上清，置冰上待測(cè)。 【注】：若增加樣本量，可按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(mL)為 1：5~10 的比例進(jìn)行提取。 2、上機(jī)檢測(cè)： 1 酶標(biāo)儀預(yù)熱 30min 以上，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至 340nm。 2 所有試劑解凍至室溫（25℃）。 3 在 96 孔板中依次加入： 試劑名稱(chēng)（μL） 測(cè)定管 樣本 40 試劑一 10 試劑二 140 試劑三 10 輕輕混勻，室溫（25℃）下，可先孵育 6min 后于 340nm 處讀取 A1，30min 后讀取 A2，△A=A2-A1。 【注】 1.若△A 的值在零附近，可以適當(dāng)延長(zhǎng)反應(yīng)時(shí)間 T 到 60min 后或更長(zhǎng)讀取 A2，改變后的 反應(yīng)時(shí)間需代入計(jì)算公式重新計(jì)算。或適當(dāng)增加樣本取樣質(zhì)量 W，則改變后的反應(yīng)時(shí) 間 T 和樣本質(zhì)量 W 需代入計(jì)算公式重新計(jì)算。 2. 若起始值 A1 太大如超過(guò) 2（如顏色較深的植物葉片，一般色素較高，則起始值相對(duì)本試劑盒僅供科研使用 2 會(huì)偏高），可以適當(dāng)減少樣本加樣量 V1（如減至 20μL，則試劑三相應(yīng)增加），則改變 后的加樣體積 V1 需代入計(jì)算公式重新計(jì)算。 或向待測(cè)樣本中加少許活性炭混勻靜置 5min 后 12000rpm, 4℃離心 10min，上清液用于檢測(cè)； 3．若上升趨勢(shì)不穩(wěn)定，可以每隔 2min 讀取一次吸光值，選取一段線(xiàn)性下降的時(shí)間段 T 參與 計(jì)算，相對(duì)應(yīng)的 A 值也代入計(jì)算公式重新計(jì)算。 五、結(jié)果計(jì)算： 1、按樣本蛋白濃度計(jì)算 單位定義：每毫克組織蛋白在每分鐘內(nèi)生成 1 nmol NADH 定義為一個(gè)酶活力單位。 PDH（nmol/min/mg prot）=[ΔA×V2÷（ε×d）×109]÷(V1×Cpr) ÷T =53.6×ΔA÷Cpr 2、按樣本鮮重計(jì)算 單位定義：每克組織在每分鐘內(nèi)生成 1nmol NADH 定義為一個(gè)酶活力單位。 PDH（nmol/min/g 鮮重）=[ΔA×V2÷（ε×d）×109]÷(W× V1÷V) ÷T =53.6×ΔA÷W V---加入提取液體積，1 mL； V1---加入樣本體積，0.04mL； V2---反應(yīng)體系總體積，2×10-4 L； d---96 孔板光徑，0.5cm； ε---NADH 摩爾消光系數(shù)，6.22×103 L / mol /cm； W---樣本質(zhì)量，g； T---反應(yīng)時(shí)間，30min； Cpr---蛋白濃度（mg/mL），建議使用本公司的 BCA 蛋白含量測(cè)定試劑盒。
