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脯an酸脫氫酶(ProDH)試劑盒,微板法
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【簡單介紹】
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脯an酸脫氫酶(ProDH)試劑盒,微板法
脯*酸脫氫酶(proline dehydragenase,PDH,EC 1.5.1.2) 催化脯*酸生成 Δ1-二氫吡咯- 5-羧酸的反應(yīng),是脯*酸降解過程的限速步驟。

脯an酸脫氫酶(ProDH)試劑盒,微板法

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本試劑盒僅供科研使用 1 脯*酸脫氫酶(PDH)試劑盒說明書 (貨號:WS1011W 微板法 96 樣) 一、產(chǎn)品簡介: 脯*酸脫氫酶(proline dehydragenase,PDHEC 1.5.1.2) 催化脯*酸生成 Δ1-二氫吡咯- 5-羧酸的反應(yīng),是脯*酸降解過程的限速步驟。脯*酸是分布zui廣泛的一種滲透物質(zhì),在脅 迫條件下很多植物可以通過增加合成、減少降解而在體內(nèi)累積大量脯*酸,降低 PDH 活性 對于防止?jié)B透脅迫對植物造成傷害、保護細胞結(jié)構(gòu)等方面具有重要意義。 脯*酸脫氫酶(PDH)催化脯*酸脫氫并使 NAD+還原成 NADH,通過檢測 NADH 340nm 處的增加速率即可得出 PDH 酶活性大小。 二、試劑盒的組成和配制: 試劑名稱 規(guī)格 保存要求 備注 提取液 液體 100mL×1 4℃保存 試劑一 粉體 mg×1 4℃保存 臨用前甩幾下,使粉體落到底部, 再加入 1.1mL 蒸餾水溶解備用 試劑二 液體 15mL×1 4℃保存 試劑三 粉體 mg×1 4℃保存 臨用前甩幾下,使粉體落到底部, 再加入 1.1mL 蒸餾水溶解備用 三、所需的儀器和用品: 酶標儀、96 孔板、臺式離心機、可調(diào)式移液器、研缽、冰和蒸餾水。 四、脯*酸脫氫酶(PDH)活性測定: 建議正式實驗前選取 2 個樣本做預(yù)測定,了解本批樣品情況,熟悉實驗流程,避免實驗 樣本和試劑浪費! 1、樣本制備: 稱取約 0.1g 組織樣本,加入 1mL 提取液,冰浴勻漿,12000rpm,4℃離心 10min, 取上清,置冰上待測。 【注】:若增加樣本量,可按照組織質(zhì)量(g):提取液體積(mL)15~10 的比例進行提取。 2、上機檢測1 酶標儀預(yù)熱 30min 以上,調(diào)節(jié)波長至 340nm。 2 所有試劑解凍至室溫(25℃)。 3 96 孔板中依次加入: 試劑名稱(μL測定管 樣本 40 試劑一 10 試劑二 140 試劑三 10 輕輕混勻,室溫(25℃)下,可先孵育 6min 后于 340nm 處讀取 A1,30min 后讀取 A2,△A=A2-A1。 【注】 1.若A 的值在零附近,可以適當延長反應(yīng)時間 T 60min 后或更長讀取 A2,改變后的 反應(yīng)時間需代入計算公式重新計算?;蜻m當增加樣本取樣質(zhì)量 W,則改變后的反應(yīng)時 T 和樣本質(zhì)量 W 需代入計算公式重新計算。 2. 若起始值 A1 太大如超過 2(如顏色較深的植物葉片,一般色素較高,則起始值相對本試劑盒僅供科研使用 2 會偏高),可以適當減少樣本加樣量 V1(如減至 20μL,則試劑三相應(yīng)增加),則改變 后的加樣體積 V1 需代入計算公式重新計算。 或向待測樣本中加少許活性炭混勻靜置 5min 12000rpm, 4℃離心 10min,上清液用于檢測; 3.若上升趨勢不穩(wěn)定,可以每隔 2min 讀取一次吸光值,選取一段線性下降的時間段 T 參與 計算,相對應(yīng)的 A 值也代入計算公式重新計算。 五、結(jié)果計算: 1、按樣本蛋白濃度計算 單位定義:每毫克組織蛋白在每分鐘內(nèi)生成 1 nmol NADH 定義為一個酶活力單位。 PDHnmol/min/mg prot=[ΔA×V2÷ε×d×109]÷(V1×Cpr) ÷T =53.6×ΔA÷Cpr 2、按樣本鮮重計算 單位定義:每克組織在每分鐘內(nèi)生成 1nmol NADH 定義為一個酶活力單位。 PDHnmol/min/g 鮮重)=[ΔA×V2÷ε×d×109]÷(W× V1÷V) ÷T =53.6×ΔA÷W V---加入提取液體積,1 mLV1---加入樣本體積,0.04mL; V2---反應(yīng)體系總體積,2×10-4 L; d---96 孔板光徑,0.5cm; ε---NADH 摩爾消光系數(shù),6.22×103 L / mol /cm; W---樣本質(zhì)量,gT---反應(yīng)時間,30minCpr---蛋白濃度(mg/mL),建議使用本公司的 BCA 蛋白含量測定試劑盒。



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