| 上海宇淳生物科技有限公司
主營(yíng)產(chǎn)品： PCR八聯(lián)排管,sigma現(xiàn)貨,Cy7試劑 |
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| 參考價(jià) | ￥2510-￥3690 |
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型號(hào)
-
品牌
其他品牌 -
廠商性質(zhì)
經(jīng)銷商 -
所在地
上海市
| 48T | 2510元 | 1 盒 可售 |
| 96T | 3690元 | 1 盒 可售 |
更新時(shí)間：2024-05-27 14:46:20瀏覽次數(shù)：237
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花青素還原酶（ANR）試劑盒,微板法
花青素還原酶（ANR）試劑盒,微板法
本試劑盒僅供科研使用 1 花青素還原酶（anthocyanidin reductase，ANR）試劑盒說明書 （貨號(hào)：WS6001W 微板法 96 樣） 一、產(chǎn)品簡(jiǎn)介： 花青素還原酶（ANR）參與調(diào)控花青素的含量水平以及原花青素的形成，是原花青素 單體生物合成過程中關(guān)鍵酶之一，在花青素積累過程中具有重要的調(diào)節(jié)作用。 花青素還原酶（ANR）在NADPH存在下使飛燕草色素轉(zhuǎn)變?yōu)楸頉]食子兒茶素和NADP+， 通過檢測(cè)反應(yīng)體系在 340nm 處的吸光值下降速率即可得出花青素還原酶（ANR）活性大小。 二、試劑盒組成和配制： 試劑名稱 規(guī)格 保存要求 備注 提取液 液體 110mL×1 瓶 4℃保存 試劑一 粉劑 mg×1 支 -20℃保存 用前甩幾下或離心使粉劑落入底部，再 加 1.2mL 蒸餾水溶解備用。 試劑二 粉劑 mg×2 支 -20℃保存 用前甩幾下或離心使粉劑落入底部，每 支分別加 0.6mL 蒸餾水溶解備用。用不 完的試劑分裝后-20℃保存，禁止反復(fù) 凍融，三天內(nèi)用完。 試劑三 液體 30mL×1 瓶 4℃保存 試劑四 粉劑μg×1 支 -20℃避光 保存 用前甩幾下或離心使粉劑落入底部，再 加 1.1mL 乙醇溶解備用，用不完的試劑 分裝后-20℃避光保存，禁止反復(fù)凍融。 三、所需的儀器和用品： 酶標(biāo)儀、96 孔板、臺(tái)式離心機(jī)、無水乙醇、水浴鍋、可調(diào)式移液器、研缽、冰。 四、花青素還原酶（ANR）活性測(cè)定： 建議正式實(shí)驗(yàn)前選取 2 個(gè)樣本做預(yù)測(cè)定，了解本批樣品情況，熟悉實(shí)驗(yàn)流程，避免實(shí)驗(yàn) 樣本和試劑浪費(fèi)！ 1、樣本制備： ① 組織樣本： 稱取約 0.1g 組織樣本，加入 1mL 提取液，冰浴勻漿，12000rpm，4℃離心 10min， 取上清置冰上待測(cè)。 【注】：若增加樣本量，可按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(mL)為 1：5~10 的比例進(jìn)行提取。 ② 液體樣本：若液體澄清可直接檢測(cè)；若渾濁則 12000rpm，4℃離心 10min，取上 清置冰上待測(cè)。 2、上機(jī)檢測(cè)： 1 酶標(biāo)儀預(yù)熱 30min 以上，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至 340nm。 2 所有試劑解凍至室溫（25℃）。 3 在 96 孔板中依次加入： 試劑名稱（μL） 測(cè)定管 樣本 20 試劑一 10 試劑二 10 試劑三 150 340nm，室溫（25℃）孵育 5min本試劑盒僅供科研使用 2 試劑四 10 充分混勻，立即于 340nm 處讀取吸光值 A1，后于 40℃溫育 20min 后，再讀取吸光值 A2，△A=A1-A2。 【注】1. 若ΔA 的值在零附近徘徊，可增加樣本加樣量 V1（如增至 40μL，則試劑三減少至 130μL）， 則改變后的 V1 需代入計(jì)算公式重新計(jì)算。 2. 若起始值 A1 太大如超過 2（如顏色較深的組織樣本，一般色素較高，則起始值相對(duì)會(huì)偏高）， 可以適當(dāng)減少樣本加樣量 V1(如減至 10μL)，則改變后的 V1 需代入計(jì)算公式重新計(jì)算。 3. 若ΔA 的值大于 0.2，則需減少反應(yīng)時(shí)間（如 40℃溫育 20min 減少至 10min），則改變后的反 應(yīng)時(shí)間 T 需代入計(jì)算公式重新計(jì)算。 五、結(jié)果計(jì)算： 1、按樣本蛋白濃度計(jì)算 酶活定義：40℃條件下，每毫克組織蛋白每分鐘氧化 1nmolNADPH 定義為一個(gè)酶活單位。 ANR 活性（nmol/min/mg prot）=[ΔA×V2÷（ε×d）×109]÷(V1×Cpr) ÷T =160.8×ΔA÷Cpr 2、按樣本鮮重計(jì)算 酶活定義：40℃條件下，每克組織每分鐘氧化 1nmolNADPH 定義為一個(gè)酶活單位。 ANR 活性（nmol/min/g 鮮重）=[ΔA×V2÷（ε×d）×109]÷(W×V1÷V) ÷T =160.8×ΔA÷W 3、按液體體積計(jì)算 酶活定義：40℃條件下，每毫升液體每分鐘氧化 1nmolNADPH 定義為一個(gè)酶活單位。 ANR 活性（nmol/min/mL）=[ΔA×V2÷（ε×d）×109]÷V1÷T =160.8×ΔA V---加入提取液體積，1 mL； V1---加入樣本體積，0.02mL； V2---反應(yīng)體系總體積，2×10-4 L； d---96 孔板光徑，0.5cm； ε---NADPH 摩爾消光系數(shù)，6.22×103 L/mol/cm； W---樣本質(zhì)量，g； T---反應(yīng)時(shí)間，20min； Cpr---蛋白濃度（mg/mL），建議使用本公司的 BCA 蛋白含量測(cè)定試劑盒。
