| 上海宇淳生物科技有限公司
主營(yíng)產(chǎn)品： PCR八聯(lián)排管,sigma現(xiàn)貨,Cy7試劑 |
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| 參考價(jià) | ￥600-￥1660 |
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型號(hào)
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品牌
其他品牌 -
廠商性質(zhì)
經(jīng)銷(xiāo)商 -
所在地
上海市
| 48T | 600元 | 1 盒 可售 |
| 96T | 1660元 | 1 盒 可售 |
更新時(shí)間：2024-05-27 11:05:42瀏覽次數(shù)：220
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肉桂酸4-羥基化酶(C4H)試劑盒,微板法
肉桂酸4-羥基化酶(C4H)試劑盒,微板法
本試劑盒僅供科研使用 1 肉桂酸 4-羥基化酶（C4H）試劑盒說(shuō)明書(shū) （貨號(hào)：WS1001W 微板法 96 樣） 一、產(chǎn)品簡(jiǎn)介： 肉桂酸-4-羥基化酶（C4H，EC 1.14.13.11）是苯丙烷類(lèi)代謝途徑的關(guān)鍵酶?？捎行д{(diào)節(jié) 與之相應(yīng)的黃酮類(lèi)化合物等次生代謝產(chǎn)物的合成，其活性可作為植物抗性的一個(gè)生理指標(biāo)。 本產(chǎn)品測(cè)試原理是以肉桂酸作為底物，在酶促反應(yīng)的最適條件下，肉桂酸-4-羥基化酶催 化底物生成 4-羥基反式肉桂酸，其在 PH 值下，產(chǎn)物 4-羥基反式肉桂酸在 340nm 下有 吸收峰，進(jìn)而計(jì)算出該酶活性大小。 二、試劑盒組成和配制： 試劑名稱(chēng) 試劑規(guī)格 保存方式 備注 提取液 液體 100mL×1 瓶 4℃保存 試劑一 液體 5mL×1 瓶 4℃保存 試劑二 粉劑×2 瓶 -20℃保存 用前甩幾下使粉劑落入底部， 每瓶再加 20mL 蒸餾水溶解，用 不完的試劑分裝后-20℃保存， 禁止反復(fù)凍融，一周內(nèi)用完。 試劑三 液體 30mL×1 瓶 4℃保存 試劑四 液體 5mL×1 瓶 4℃保存 試劑五 液體 6mL×1 瓶 4℃保存 三、所需用的儀器與用品： 酶標(biāo)儀、96 孔板、臺(tái)式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、研缽、冰和蒸餾水。 四、肉桂酸 4-羥基化酶（C4H）活性檢測(cè)： 建議正式實(shí)驗(yàn)前選取 2 個(gè)樣本做預(yù)測(cè)定，了解本批樣品情況，熟悉實(shí)驗(yàn)流程，避免實(shí)驗(yàn) 樣本和試劑浪費(fèi)！ 1、樣本制備： 稱(chēng)取約 0.1g 組織（水分充足的樣本可取 0.5g），加入 1mL 提取液組織，進(jìn)行冰浴勻 漿。12000rpm, 4℃離心 10min，取上清，置冰上待測(cè)。 【注】：若增加樣本量，可按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(mL)為 1：5~10 的比例進(jìn)行提取 2、上機(jī)檢測(cè)： ① 酶標(biāo)儀預(yù)熱 30min 以上，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至 340nm。 ② 在 EP 管中依次加入： 試劑（μL） 測(cè)定管 空白管（僅做一次） 樣本 100 試劑一 50 50 試劑二 350 350 試劑三 300 400 混勻，30℃水浴反應(yīng) 30min 試劑四 50 50 混勻，靜置 2min 試劑五 60 60 混勻后，取 200μL 轉(zhuǎn)移至 96 孔板，在 340nm 下讀取 吸光值 A，△A=A 測(cè)定-A 空白。本試劑盒僅供科研使用 2 【注】若△A 的值在零附近徘徊，可增加樣本加樣量（如增加至 200μL，則試劑三相應(yīng)減少） 或增加反應(yīng)時(shí)間 T，則改變后的加樣體積 V1 和 T 需代入計(jì)算公式重新計(jì)算。 五、結(jié)果計(jì)算： 1. 按樣本鮮重計(jì)算： 酶活定義：每克組織每分鐘產(chǎn)生 1nmol 的 4-羥基反式肉桂酸為一個(gè)酶活力單位。 C4H（nmol/min/g 鮮重）=[(△A÷ε÷d×V2×109) ]÷(W×V1÷V)÷T =24.8×ΔA÷W 3. 按樣本蛋白濃度計(jì)算： 酶活定義：每毫克組織蛋白每分鐘產(chǎn)生 1nmol 的 4-羥基反式肉桂酸為一個(gè)酶活力單位。 C4H（nmol/min/mg prot）=[(△A÷ε÷d×V2×109) ]÷(V1×Cpr) ÷T =24.8×ΔA÷Cpr ε ---4-羥基反式肉桂酸在此反應(yīng)條件下于 340nm 處的摩爾吸光系數(shù)，2.45×104 L/mol /cm； V---加入提取液體積，1 mL； V1---加入樣本體積，0.1 mL； V2 ---反應(yīng)體系總體積，910μL=9.1×10-4 L； d --96 孔板光徑，0.5 cm； T---反應(yīng)時(shí)間，30 min； W---樣本質(zhì)量，g； Cpr---樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/mL；建議使用本公司的 BCA 蛋白含量檢測(cè)試劑盒。
