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上海宇淳生物科技有限公司

主營產(chǎn)品: PCR八聯(lián)排管,sigma現(xiàn)貨,Cy7試劑

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磷脂酶C(PLC)試劑盒,微板法
磷脂酶C(PLC)試劑盒,微板法
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48T1640元1 盒 可售

更新時間:2024-05-27 09:56:56瀏覽次數(shù):379

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【簡單介紹】
級別 其他
磷脂酶C(PLC)試劑盒,微板法
磷脂酶 C(PLC,EC 3.1.4.3)是一種水解甘油磷酸酯 C3 位點甘油磷酸酯鍵的脂類水解酶,廣泛存在于微生物及動植物的組織和細胞中,在細胞代謝、細胞傳遞、生長發(fā)育等方面具有重要作用。

磷脂酶C(PLC)試劑盒,微板法

磷脂酶C(PLC)試劑盒,微板法

本試劑盒僅供科研使用 1 磷脂酶 CPhospholipases CPLC)活性測定試劑盒說明書 (貨號:WS4290W 微板法 48 樣) 一、產(chǎn)品簡介: 磷脂酶 CPLC,EC 3.1.4.3)是一種水解甘油磷酸酯 C3 位點甘油磷酸酯鍵的脂類水解酶, 廣泛存在于微生物及動植物的組織和細胞中,在細胞代謝、細胞傳遞、生長發(fā)育等方面具 有重要作用。 磷脂酶 C 催化水解 O-(4-硝基苯基)*堿(NPPC)產(chǎn)生對硝基*酚(PNP),該產(chǎn)物在 405nm 有吸收峰。通過檢測 PNP 405nm 下的增加速率,即可得到 PLC 酶活性大小。 二、試劑盒的組成和配制: 試劑名稱 規(guī)格 保存要求 備注 提取液 液體 60mL×1 4℃保存 用前搖勻再用。 試劑一 粉劑 mg×2 -20℃保存 用前甩幾下或離心使粉劑落入底 部,每支加 0.3mL 蒸餾水溶解備 用。用不完的試劑-20℃保存。 試劑二 粉劑 mg×1 4℃保存 用前甩幾下使粉劑落入底部,加 1.1mL 蒸餾水溶解備用。 試劑三 液體 15mL×1 4℃保存 試劑四 液體 2.5mL×1 4℃保存 標準品 粉劑×1 4℃保存 若重新做標曲,則用到該試劑。 三、所需的儀器和用品: 酶標儀、96 孔板、低溫離心機、水浴鍋或恒溫培養(yǎng)箱、可調式移液器和蒸餾水。 四、磷脂酶 CPLC)活性測定: 建議正式實驗前選取 2 個樣本做預測定,了解本批樣品情況,熟悉實驗流程,避免實 驗樣本和試劑浪費! 1、樣本制備: ① 組織樣本:取約 0.1g 組織(水分充足的果實樣本可取 0.2-0.3g),加入 1mL 提取液(用 前搖勻再用),進行冰浴勻漿,13000rpm,4℃離心 15min,取上清,置冰上待測。 【注】:若增加樣本量,可按照組織質量(g):提取液體積(mL)15~10 的比例提取。 ② 細菌/細胞樣本:先收集細菌或細胞到離心管內,離心后棄上清;取約 500 萬細菌或細 胞加入 1mL 提取液,超聲波破碎細菌或細胞(冰浴,功率 200W,超聲 3s,間隔 10s, 重復 30 次);13000rpm 4℃離心 15min,取上清,置冰上待測。 【注】:若增加樣本量,可按照細菌/細胞數(shù)量(104):提取液(mL)為 500~10001 的比例進行提取。 2、上機檢測: ① 酶標儀預熱 30min,調節(jié)波長到 405nm,所有試劑解凍至室溫(25℃)。 ② 在 96 孔板中依次加入: 試劑名稱(μL測定管 對照管 樣本 30 30 試劑一 10 試劑二 10 10 試劑三 130 140 混勻,37℃孵育反應 30min試劑四 20 20本試劑盒僅供科研使用 2 混勻,于 405nm 處讀取吸光值 AA=A 測定-A 對照(每個樣本 需做一個自身對照)。 【注】:A 的值小于 0.01,可增加樣本量 V1(如增至 60μL,則試劑三相應減少)或延長反應時 T(如增至 60min 或更長),則改變后的 V1 T 須代入公式重新計算。 A 的值超過 1,可減少樣本量 V1(如減至 10μL,則試劑三相應增加)或縮短反應時間 T(如減至 10min);或對最終的待檢液用蒸餾水稀釋,則改變后的 V1 T 和稀釋倍數(shù) D 代入計算公式; 五、結果計算: 1、標準曲線:y = 0.0575x - 0.0042,x PNP 摩爾質量(nmol),y 是△A。 2、按照樣本蛋白濃度計算: 酶活定義:37℃中每毫克蛋白每分鐘水解 1nmol NPPC 產(chǎn)生 PNP 定義為 1 個酶活單位。 PLC (nmol/min/mg prot)=[(ΔA+0.0042)÷0.0575]÷(Cpr×V1)÷T×D=19.3×(ΔA+0.0042)÷Cpr×D 3、按照樣本質量計算: 酶活定義:37℃中每克組織每分鐘水解 1nmol NPPC 產(chǎn)生 PNP 定義為 1 個酶活單位。 PLC (nmol/min/g 鮮重)=[(ΔA+0.0042)÷0.0575]÷(W×V1÷V)÷T×D =19.3×(ΔA+0.0042)÷W×D 4、按細菌/細胞數(shù)量計算: 酶活定義:每 104個細胞每分鐘水解 1nmol NPPC 產(chǎn)生 PNP 定義為 1 個酶活單位。 PLC (nmol/min/104 cell)=[(ΔA+0.0042)÷0.0575]÷(500×V1÷V)÷T×D=0.04×(ΔA+0.0042)×D 5、按液體體積計算: 酶活定義:37℃中每毫升液體每分鐘水解 1nmol NPPC 產(chǎn)生 PNP 定義為 1 個酶活單位。 PLC (nmol/min/mL)=[(ΔA+0.0042)÷0.0575]÷V1÷T×D=19.3×(ΔA+0.0042)×D V---提取液體積,1 mL; V1---加入反應體系中上清液體積(mL),0.03mL; T---反應時間(min),30 min; D---稀釋倍數(shù),未稀釋即為 1; W ---樣品質量,g; 500---細胞數(shù)量; Cpr---粗酶液蛋白質濃度(mg/mL),建議使用本公司的 BCA 蛋白質含量測定試劑盒; V---提取液體積,1 mL; V1---加入反應體系中上清液體積(mL),0.03mL; T---反應時間(min),30 min; D---稀釋倍數(shù),未稀釋即為 1; W ---樣品質量,g500---細胞數(shù)量; Cpr---粗酶液蛋白質濃度(mg/mL),建議使用本公司的 BCA 蛋白質含量測定試劑盒; 附:標準曲線制作過程: 1 制備標準品母液(10μmol/mL):向標準品 EP 管里面加入 1.4ml 蒸餾水超聲溶解。 2 把母液用蒸餾水稀釋成以下濃度梯度的標準品:0, 0.1, 0.2, 0.3, 0.4, 0.5 μmol/mL。也 可根據(jù)實際樣本來調整標準品濃度。 3 96 孔板中依次加入:30μL 標準品+150μL 試劑三+20μL 試劑四,混勻于 405nm 讀值,根據(jù)結果即可制作標準曲線。



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