| 上海宇淳生物科技有限公司
主營產品： PCR八聯(lián)排管,sigma現(xiàn)貨,Cy7試劑 |
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13061909058
| 參考價 | ￥140 |
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型號
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品牌
其他品牌 -
廠商性質
經銷商 -
所在地
上海市
| 96T | 140元 | 1 盒 可售 |
更新時間：2024-05-24 11:13:05瀏覽次數(shù)：325
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蛋白含量(SP)試劑盒(考馬斯亮藍法),微板法
蛋白含量(SP)試劑盒(考馬斯亮藍法),微板法
本試劑盒僅供科研使用 1 考馬斯亮藍法測蛋白含量試劑盒說明書 （貨號：WS7140W 微板法 96 樣） 一、產品簡介： 在酸性溶液中，考馬斯亮藍 G-250 與蛋白質結合形成藍色復合物；經光譜掃描，該藍 色復合物在 600nm 處有吸收峰，在一定的蛋白濃度范圍（1-1000μg/mL）內，其顏 色的深淺與蛋白質的含量成正比。 二、測試盒組成和配制： 試劑名稱 規(guī)格 保存要求 備注 試劑一 液體 20mL×1 瓶 4℃保存 標準品 液體 1mL×1 支 4℃保存 若重新做標曲，則用到該試劑 三、所需的儀器和用品： 酶標儀、96 孔板、離心機、可調式移液器、研缽和蒸餾水。 四、蛋白含量檢測： 建議正式實驗前選取 2 個樣本做預測定，了解本批樣品情況，熟悉實驗流程，避免實驗 樣本和試劑浪費！ 1、樣本制備： 1 組織樣本： 稱取約 0.1g 組織，加入 1mL 提取液（提取液可選用酶提取緩沖液、蒸餾水、生理鹽 水）冰浴勻漿，12000rpm，4℃離心 10min，取上清，即待測液。 【注】：依據(jù)研究經驗，一般需將樣本粗提液稀釋到適當倍數(shù)再進行測定，如 10 倍。實 驗前可以先選 2 個樣本測定，摸索確定適合本次實驗的稀釋倍數(shù)。 2 細菌或細胞樣本： 先收集細菌或細胞到離心管內，離心后棄上清；取 500 萬細菌或細胞加入 1mL 提取 液；超聲波破碎細菌或細胞（冰浴，功率 20％或 200W，超聲 3s，間隔 10s，重復 30 次），12000rpm，4℃離心 10min，取上清，置冰上待測。 【注】：依據(jù)研究經驗，一般需將樣本粗提液稀釋到適當倍數(shù)再進行測定，如 10 倍。實 驗前可以先選 2 個樣本測定，摸索確定適合本次實驗的稀釋倍數(shù)。 3 液體樣本：澄清無色液體樣品可以直接測定。若渾濁，離心后取上清檢測。 【注】：依據(jù)研究經驗，一般需將樣本稀釋到適當倍數(shù)再進行測定，如 10 倍。實驗前 可以先選 2 個樣本測定，摸索確定適合本次實驗的稀釋倍數(shù)。 2、上機檢測： ① 酶標儀預熱 30 min 以上，設定波長為 600nm。 ② 在 96 孔板中依次加入： 試劑名稱（μL） 測定管 空白管(只做一次) 待測液 40 蒸餾水 40 試劑一 200 200 混勻，,置于室溫（25℃）靜置 10min，600nm 處測定吸光值 A （5~15min 完成比色），△A= A 測定管-A 空白管。 【注】：1.確保蛋白濃度在 0~100µg/ml 范圍內，否則需要做相應稀釋，即使 A 測定的值低于 1.2；稀 釋倍數(shù) D 帶入公式計算。 2.去污劑、Triton X-100、十二烷基硫酸鈉（SDS）和 0.1mol/L 的 NaOH 溶液對該實驗會有影響。本試劑盒僅供科研使用 2 五、結果計算： 1、標準曲線：y = 3.8457x + 0.0136；x 是標準品濃度（mg/mL），y 是△A。 2、蛋白含量 (mg/g 鮮重)=[(△A-0.0136)÷3.8457×V1]÷(W×V1÷V)×D =0.26×(△A-0.0136)×D÷W 3、蛋白含量(mg/mL)= [(△A-0.0136)÷3.8457×V1]÷V1×D=0.26×(△A-0.0136)×D V---提取液體積：1mL； V1---加入粗提液體積：0.04mL； W---樣本質量：g； D---稀釋倍數(shù)，未稀釋即為 1。 附：標準曲線制作過程： 1 標準品母液（0.5mg/mL）。 2 把母液用蒸餾水稀釋成以下濃度梯度的標準品：0, 0.02, 0.04, 0.06, 0.08, 0.1. mg/mL。 也可根據(jù)實際樣本來調整標準品濃度。 3 依據(jù)測定管加樣表操作，根據(jù)結果即可制作標準曲線。
