訂購產(chǎn)品參數(shù):
產(chǎn)品名稱:豬細小病毒PCR檢測試劑盒
英文名稱:Porcine Parvovirus(PPV)PCR
試劑盒準備物品:
清理液(A) 毫升
染色液(t B) 微升
稀釋液(C) 毫升
溶解液(tD) 毫升
產(chǎn)品說明書 1份
反應(yīng)五要素:
參加PCR反應(yīng)的物質(zhì)主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物:引物是PCR特異性反應(yīng)的關(guān)鍵,PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補的程度。理論上,只要知道任何一段模板DNA序列, 就能按其設(shè)計互補的寡核苷酸鏈做引物,利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴增。設(shè)計引物應(yīng)遵循以下原則:
①引物長度: 15-30bp,常用為20bp左右。
②引物擴增跨度: 以200-500bp為宜,特定條件下可擴增長至10kb的片段。
③引物堿基:G+C含量以40-60%為宜,G+C太少擴增效果不佳,G+C過多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC*隨機分布,避免5個以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級結(jié)構(gòu),避免兩條引物間互補,特別是3'端的互補,否則會形成引物二聚體,產(chǎn)生非特異的擴增條帶。
⑤引物3'端的堿基,特別是末及倒數(shù)第二個堿基,應(yīng)嚴格要求配對,以避免因末端堿基不配對而導(dǎo)致PCR失敗。
⑥引物中有或能加上合適的酶切位點, 被擴增的靶序列*有適宜的酶切位點, 這對酶切分析或分子克隆很有好處。
⑦引物的特異性:引物應(yīng)與核酸序列數(shù)據(jù)庫的其它序列無明顯同源性。
引物量:每條引物的濃度0.1~1umol或10~100pmol,以*引物量產(chǎn)生所需要的結(jié)果為好,引物濃度偏高會引起錯配和非特異性擴增,且可增加引物之間形成二聚體的機會。
操作豬細小病毒PCR檢測試劑盒注意事項說明:
1. 實驗嚴格按照說明書的操作進行,實驗結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準。
2. 酶標(biāo)包被板開封后如未用完,應(yīng)立即裝入密封袋中加干燥劑保存。
3. 建議所有的標(biāo)準品、樣本和空白對照都做雙份檢測,取平均值,以減小實驗誤差。
4. 為避免交叉污染,標(biāo)準品、樣本和空白對照每加一個就要更換一次吸頭;酶標(biāo)工作液、*和底物等公共組分,要懸臂加樣,不得碰到微孔;不得重復(fù)使用封板膜。
實驗的基本操作流程
A 包被ELISA板子或使用商品化ELISA板
B 讓標(biāo)本中的抗原/抗體與固相載體上的抗體/抗原結(jié)合,形成固相復(fù)合物。
C 根據(jù)顏色反應(yīng)的程度進行抗原/抗體的定性或定量。
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