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上海通蔚生物有限公司


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Trizol(總RNA提取試劑)

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產(chǎn)品型號(hào)

品       牌

廠商性質(zhì)經(jīng)銷商

所  在  地上海市

聯(lián)系方式:王珺茹查看聯(lián)系方式

更新時(shí)間:2019-01-11 11:51:34瀏覽次數(shù):4620次

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經(jīng)營(yíng)模式:經(jīng)銷商

商鋪產(chǎn)品:200條

所在地區(qū):上海上海市

聯(lián)系人:王珺茹 (經(jīng)理)

產(chǎn)品簡(jiǎn)介

Trizol(總RNA提取試劑)為客戶供應(yīng)*貼心的服務(wù),與每一位顧客建立良好的合作關(guān)系,通過不定期進(jìn)行回訪,經(jīng)過不斷的實(shí)驗(yàn)優(yōu)化和改進(jìn),積累大量的經(jīng)驗(yàn),力求做到更好!

詳細(xì)介紹

Trizol(總RNA提取試劑)產(chǎn)品簡(jiǎn)介:

Trizol是一種新型的用于細(xì)胞或組織的總RNA提取試劑,Leagene Trizol采用與Invitrogen TRIzol相似的原理和方法,其顏色、抽提的方法和步驟與后者*相同。Leagene Trizol含酚和異硫酸胍等物質(zhì),能迅速裂解細(xì)胞或組織并且滅活核酸酶,保持RNA的完整性。加入并離心后,溶液形成上清層為水相(無色)、中間層、下層為有機(jī)相(紅色)。上清層用沉淀回收總RNA,中間層用乙醇沉淀回收DNA,下層用沉淀回收蛋白。

Trizol適用于從各種組織或細(xì)胞中快速分離總RNA,既可用于小量樣品(50~100 mg組織、5×106細(xì)胞),也可用于大量樣品(>1g組織/>107細(xì)胞)。提取的總RNA質(zhì)量高,可用于Northern blot、Dot blot、polyA篩選、體外翻譯、RNase保護(hù)分析和分子克隆。本產(chǎn)品具有以下特點(diǎn):①適用范圍廣;②操作簡(jiǎn)單,整個(gè)過程1小時(shí)內(nèi)完成;③純度高;④污染少。

Trizol(總RNA提取試劑)操作步驟(僅供參考):

樣品準(zhǔn)備

⑴貼壁細(xì)胞:

①直接裂解:直接在培養(yǎng)瓶/皿中加入Trizol裂解細(xì)胞,每10cm2面積加1ml Trizol,用移液器吹打混勻。

②*消化:用無菌PBS洗滌細(xì)胞后,加入含有0.05~0.25%*的PBS處理細(xì)胞,當(dāng)細(xì)胞脫離容器壁后,加入含有血清的培養(yǎng)基終止反應(yīng),將細(xì)胞溶液轉(zhuǎn)移至無RNase的離心管中,5000~6000g離心5 min,收集細(xì)胞沉淀,去除上清。收集細(xì)胞時(shí)一定要將細(xì)胞培養(yǎng)液去除干凈,否則裂解不*,降低RNA收獲率。  

⑵懸浮細(xì)胞:無需清洗細(xì)胞,直接5000~6000 g離心5 min,收集細(xì)胞。每5×106~107動(dòng)物、植物和酵母細(xì)胞或每107細(xì)菌細(xì)胞加入1ml Trizol。

⑶組織:取新鮮動(dòng)物或者植物組織或者-70℃凍存組織,50~100mg組織在液氮中充分研磨或者加入1ml Trizol研磨或者用勻漿器勻漿處理。樣品體積一般不超過Trizol體積的10%。研磨要迅速,以1min為佳。

⑷血液:取0.5~1 ml新鮮或凍存的血液,12000g離心5 min,去除血漿,加入1ml Trizol,充分振蕩混勻。

核酸分離:充分振蕩混勻(可以置于低溫/超低溫冰箱凍存5~10 min后,充分振蕩,反復(fù)1~3次),將裂解樣品或勻漿液室溫放置5~10 min,使核蛋白與核酸*分離。

樣品分層:加入0.2 ml/1ml Trizol,劇烈振蕩15 s,室溫放置2~3 min。置于4℃離心機(jī),12000 g離心10~15 min。上層為水相,中間層和下層為有機(jī)相,RNA在上層水相。

沉淀RNA:吸取上層水相(約500μl)轉(zhuǎn)移至無RNase的離心管中(不要吸取任何中間層物質(zhì),否則會(huì)有染色體DNA污染),加入等體積混勻(或者加入1.2倍體積Leagene TrizolRNA沉淀液,超低溫冰箱放置2~3hr,可以大大提高RNA回收率),室溫放置15~20 min。12000 g 4℃離心10 min,離心后管側(cè)或管底形成膠狀沉淀,棄上清。

洗滌RNA:加入1ml DEPC水配制的75%乙醇/1ml Trizol洗滌沉淀(或者加入1ml Leagene TrizolRNA洗滌液,可以大大提高RNA純度),室溫放置5~10 min,7500g 4℃離心5 min,棄上清。室溫干燥5~10 min,不宜過分干燥,否則RNA難以溶解。

溶解RNA:加入30~50ul RNase-free ddH2O充分溶解RNA,-70℃*保存或直接用于后續(xù)試驗(yàn)。對(duì)于肝、胰腺、腎等組織中RNase含量高的樣品,沉淀時(shí)用*去離子甲酰胺溶解。

 

分析與定量:

測(cè)定樣品在260 nm和280 nm的吸收值確定RNA的質(zhì)量。按1OD=40pg RNA計(jì)算RNA的產(chǎn)率。OD260/280在1.8~2.0視為抽提RNA純度較好。濃度在4μg/ml以上的樣品適于用分光光度計(jì)測(cè)定。

進(jìn)行甲醛變性瓊脂糖電泳,確定RNA的完整性和污染情況。

核酸分析儀測(cè)定RNA的質(zhì)量和純度。

Trizol(總RNA提取試劑)注意事項(xiàng):

1、 樣品保存:加入Trizol混勻后,樣品可在-70℃放置1~2月;RNA樣品可以在70%酒精中-70℃保存2~4周:如果需要*保存,應(yīng)置于超低溫冰箱中保存。

2、 Trizol是強(qiáng)腐蝕性物質(zhì),污染皮膚或眼睛后,立即用清水或生理鹽水沖洗,必要時(shí)尋求醫(yī)生的幫助。

3、 Trizol可常溫運(yùn)輸,建議保存4℃保存。

4、 為了您的安全和健康,請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。

 

 


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