肢體遠隔缺血預處理和*后處理的聯(lián)合應用對大鼠心肌缺血再灌注損傷保護作用及機制的實驗研究
摘要：一部分肢體遠隔缺血預處理和*后處理的聯(lián)合應用對大鼠心肌缺血再灌注損傷的保護作用目的通過建立大鼠在體心肌缺血再灌注損傷模型,觀察模型在缺血再灌注期間血流動為學改變、心臟收縮與舒張功能改變、血清心肌生物學標志物及心肌梗死面積等指標,探索肢體遠隔缺血預處理和*后處理對心肌缺血再灌注損傷的協(xié)同保護作用效果。方法成年SD大鼠50只,建立急性大鼠在體心肌缺血再灌注損傷模型(缺血30 min,再灌注2 h)。隨機分為空白對照組(CON組)、缺血再灌注組(I/R組)、肢體遠隔缺血預處理組(RIPC組)、elisa試劑盒*后處理組(SPC組)和肢體遠隔缺血預處理和*后處理聯(lián)合應用組(RIPC+SPC組)。采用Powerlab數(shù)據(jù)采集分析系統(tǒng)監(jiān)測血流動力學(HR、MAP和RPP),心律失常情況并進行評分及心功能指標(LVSP、LVDEP、+dp/dtmax、-dp/dtmax),采用酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)檢測心肌生物學指標(hs-cTnT、cTnT、CK-MB)血清濃度,采用三苯四氮唑(TTC)染色法測定心肌梗死范圍。結(jié)果與I/R組比較,RIPC組、SPC組和RIPC+SPC組的血流動力學(HR、MAP和RPP)更加穩(wěn)定,心律失常發(fā)生率及評分明顯降低,心臟收縮與舒張功能明顯增強,血清hs-cTnT、cTnT、CK-MB濃度明顯降低,心肌梗死面積顯著縮小,差異均有統(tǒng)計學意義。與RIPC組或SPC組比較,RIPC+SPC組血流動力學(HR、MAP和RPP)進一步穩(wěn)定,心律失常發(fā)生率及評分進一步降低,心臟收縮與舒張功能進一步增強,血清hs-cTnT、cTnT、CK-MB濃度進一步降低,心肌梗死面積進一步縮小,差異均有統(tǒng)計學意義。結(jié)論采用大鼠在體心肌缺血再灌注損傷模型,聯(lián)合應用肢體遠隔缺血預處理和*后處理,可獲得協(xié)同性的心肌保護作用,血流動力學更加穩(wěn)定,心律失常明顯減少、心功能明顯改善。第二部分肢體遠隔缺血預處理和*后處理的聯(lián)合應用對大鼠心肌缺血再灌注損傷的保護機制目的通過建立大鼠在體心肌缺血再灌注損傷模型,探索肢體遠隔缺血預處理和*后處理通過炎癥信號通路和凋亡途徑參與對心肌保護的作用機制。方法成年SD大鼠50只,建立急性大鼠在體心肌I/R損傷模型。隨機分為空白對照組(CON組)、缺血再灌注組(I/R組)、肢體遠隔缺血預處理組(RIPC組)、*后處理組(SPC組)和肢體遠隔缺血預處理和*后處理聯(lián)合應用組(RIPC+SPC組)肢體遠隔缺血預處理和*后處理聯(lián)合應用組(RIPC+SPC組)。采用H&E染色檢測心肌組織病理學改變;采用ELISA方法檢測血清炎癥細胞因子(IL-8,IL-6和TNF-α)含量;采用qRT-PCR檢測TLR4/MyD88/NF-κB(p65)炎癥通路;通過TUNEL法檢測心肌細胞Bcl-2/Caspase-3/PARP調(diào)亡途徑。結(jié)果與I/R組比較,RIPC組、SPC組和RIPC+SPC組的心肌細胞炎癥反應明顯減輕;炎性細胞因子(IL-6、IL-8和TNF-α)表達顯著下降;炎性介質(zhì)(MyD88、NF-κB(p65))的mRNA表達明顯下調(diào),而抗炎因子IKB-α表達上調(diào)。抑/促凋亡基因(Bcl-2/Bax)比值顯著升高,C-Caspase-3蛋白表達顯著降低,而PARP蛋白表達明顯提高。與RIPC組或SPC組比較,RIPC+SPC組心肌細胞炎癥反應進一步減輕;炎性細胞因子(IL-6、IL-8和TNF-α)表達進一步下降;炎性介質(zhì)(MyD88、NF-κB(p65))的mRNA表達進一步下調(diào),而抗炎因子IKB-α表達進一步上調(diào)。抑/促凋亡基因(Bcl-2/Bax)比值進一步升高,C-Caspase-3蛋白表達進一步降低,而PARP蛋白表達進一步提高。結(jié)論1、肢體遠隔缺血預處理和*后處理的聯(lián)合應用,可顯著抑制心肌細胞炎癥反應和調(diào)亡,減輕心肌組織炎癥和細胞凋亡,心肌組織結(jié)構(gòu)和細胞形態(tài)明顯改善。elisa試劑盒2、肢體遠隔缺血預處理和*后處理通過TLR4/MyD88/NF-κB(p65)炎癥信號轉(zhuǎn)導通路減輕心肌細胞炎癥反應和通過Bcl-2/Caspase-3/PARP凋亡信號轉(zhuǎn)導通路減少心肌細胞凋亡,共同減輕心肌缺血再灌注損傷,從而保護心肌組織。
