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ELISA技術(shù)法的操作要點(diǎn)

閱讀:418發(fā)布時(shí)間:2019-3-1

ELISA技能法的操作要點(diǎn)

 血清標(biāo)本可按常規(guī)辦法采集,應(yīng)留心防止溶血,紅細(xì)胞溶解時(shí)會(huì)開釋出具有過氧化物酶活性的物質(zhì),以HRP 為標(biāo)記的ELISA 測(cè)定中,溶血標(biāo)本或許會(huì)添加非特異性顯色。ELISA的操作因固相載體的形成不同而有所差異,海內(nèi)醫(yī)學(xué)檢修一般均用板式點(diǎn)。

的試劑,良好的儀器和準(zhǔn)確的操作是保證ELISA試劑盒檢測(cè)結(jié)果正確可靠的必要條件。血清標(biāo)本宜在新鮮時(shí)檢測(cè)。血漿中除尚含有纖維蛋白原和抗凝劑外,其他成份均同即是血清。如有細(xì)菌污染,菌體中或許含有內(nèi)源性HRP ,也會(huì)發(fā)生假陽性反應(yīng)。有些標(biāo)本可直接進(jìn)行測(cè)定(如血清、尿液),有些則需經(jīng)預(yù)處理(如糞便和某些分泌物)。制備血漿標(biāo)本需借助于抗凝劑,而血清標(biāo)本只要待血清天然凝結(jié)、血縮短后即可取得。大部分ELISA檢測(cè)均以血清為標(biāo)本。在ELISA中血漿和血清可相等使用。凍住血清融解后,蛋白質(zhì)局部濃縮,分布不均,應(yīng)充分混勻宜輕緩,防止氣泡,可上下倒置混和,不要在混勻器上強(qiáng)烈振蕩?;鞚峄蛴谐恋淼难鍢?biāo)本應(yīng)先離心或過濾,弄清后再檢測(cè)。

標(biāo)本的采納和保存
    可用作ELISA測(cè)定的標(biāo)本十分廣泛,體液(如血清)、分泌物(唾液)和排泄物(如尿液、糞便)等均可作標(biāo)本以測(cè)定其中某種抗體或抗原成份。反復(fù)凍融會(huì)使抗體效價(jià)跌落,所以測(cè)抗體的血清標(biāo)本如需保存作多次檢測(cè),宜少量分裝冰存。一般說來,在5天內(nèi)測(cè)定的血清標(biāo)本可放置于4℃,超越一周測(cè)定的需低溫冰存。如在冰箱中保存過久,其中的可發(fā)生聚合,在間接法ELISA 中可使本底加深。保存血清自采集時(shí)就應(yīng)留心無菌操作,也可加入適當(dāng)防腐劑。除特殊情況外,在醫(yī)學(xué)檢修中均以血清作為檢測(cè)標(biāo)本。本文將敘述板式ELISA各個(gè)操作過程的留心要點(diǎn),珠式、管式及磁性球ELISA,進(jìn)口ELISA試劑盒均與特殊儀器配合使用,兩者均有具體的使用說明,嚴(yán)厲遵循劃定操作,必能得出正確的結(jié)果。


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