M15大腸桿菌

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更新時間：2018-06-14 15:25:28瀏覽次數(shù)：246次

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上海聯(lián)邁生物工程有限公司

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產(chǎn)品簡介

M15大腸桿菌本產(chǎn)品為E. coli M15菌株，來源于K12品系。細胞含有包含反式lac 抑制子的pREP4質(zhì)粒，保證高度調(diào)控的表達。菌株攜帶有阻抑質(zhì)粒pREP4，該質(zhì)粒高水平的表達lac抑制子，在IPTG誘導前反式抑制蛋白表達。通過卡那霉素抗性篩選可以保持pREP4質(zhì)粒在菌株中的穩(wěn)定性。M15菌株具有卡那霉素抗性。

詳細介紹

M15大腸桿菌

名稱	規(guī)格	價格	手冊
M15大腸桿菌	1 管	詢價

本產(chǎn)品為E. coli M15菌株，來源于K12品系。細胞含有包含反式lac 抑制子的pREP4質(zhì)粒，保證高度調(diào)控的表達。菌株攜帶有阻抑質(zhì)粒pREP4，該質(zhì)粒高水平的表達lac抑制子，在IPTG誘導前反式抑制蛋白表達。通過卡那霉素抗性篩選可以保持pREP4質(zhì)粒在菌株中的穩(wěn)定性。M15菌株具有卡那霉素抗性。
RNA提取法：試劑中的主要成分為異硫氰酸胍和苯酚，其中異硫氰酸胍可裂解細胞，促使核蛋白體的解離，使RNA與蛋白質(zhì)分離，并將RNA釋放到溶液中。當加入氯時，它可抽提酸性的苯酚，而酸性苯酚可促使RNA進入水相，離心后可形成水相層和有機層，這樣RNA與仍留在有機相中的蛋白質(zhì)和DNA分離開。水相層(無色)主要為RNA，有機層(黃色)主要為DNA和蛋白質(zhì)。
實驗步驟：
1、RNA的提取;
2、反轉錄合成cDNA;
3、PCR擴增;
4、產(chǎn)物的電泳和結果的測定。
RT-PCR是將RNA的反轉錄(RT)和cDNA的聚合酶鏈式擴增(PCR)相結合的技術。首先經(jīng)反轉錄酶的作用從RNA合成 cDNA，再以cDNA為模板，擴增合成目的片段。RT-PCR可以一步法或兩步法的形式進行。在兩步法RT-PCR中，每一步都在zui條件下進行。
堿變性提取質(zhì)粒DNA是基于染色體DNA與質(zhì)粒DNA的變性與復性的差異而達到分離目的。在pH高達12.6的堿性條件下，染色體DNA的氫鍵斷裂，雙螺旋結構解開而變性。質(zhì)粒DNA的大部分氫鍵也斷裂，但超螺旋共價閉合環(huán)狀的兩條互補鏈不會*分離，當以pH4.8的NaAc高鹽緩沖液去調(diào)節(jié)其pH至中性時，變性的質(zhì)粒DNA又恢復原來的構型，保存在溶液中，而染色體DNA不能復性而形成纏連的網(wǎng)狀結構，通過離心，染色體DNA與不穩(wěn)定的大分子RNA、蛋白質(zhì)-SDS復合物等一起沉淀下來而被除去。
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