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通用型RT-LAMP試劑盒

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通用型RT-LAMP試劑盒本產(chǎn)本試劑盒可以用于RT-LAMP等溫?cái)U(kuò)增，RT-LAMP即逆轉(zhuǎn)錄和Loop-Mediated Isothermal Amplification（環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增）的結(jié)合，專門用于快速擴(kuò)增RNA。LAMP是2000年才出現(xiàn)的一種新穎的等溫核酸擴(kuò)增方法。它利用4或6條模板專一的特異引物和具有鏈置換能力的DNA 聚合酶，在等溫條件下（63℃左右） 30－60分鐘完成擴(kuò)增。該技術(shù)

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通用型RT-LAMP試劑盒

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通用型RT-LAMP試劑盒	50次	詢價(jià)

本產(chǎn)本試劑盒可以用于RT-LAMP等溫?cái)U(kuò)增，RT-LAMP即逆轉(zhuǎn)錄和Loop-Mediated Isothermal Amplification（環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增）的結(jié)合，專門用于快速擴(kuò)增RNA。LAMP是2000年才出現(xiàn)的一種新穎的等溫核酸擴(kuò)增方法。它利用4或6條模板專一的特異引物和具有鏈置換能力的DNA 聚合酶，在等溫條件下(63℃左右) 30－60分鐘完成擴(kuò)增。該技術(shù)在靈敏度、特異性和檢測(cè)范圍等指標(biāo)上能媲美甚至優(yōu)于RT-PCR技術(shù)，同時(shí)還不需要模板的熱變性、溫度循環(huán)、電泳及紫外觀察等過程，不依賴任何專門的儀器設(shè)備。目前已成功應(yīng)用于人類及動(dòng)植物、細(xì)菌、病毒、寄生蟲、真菌等病原體的快速檢測(cè)。本試劑盒具有下列特點(diǎn)：

1.高特異性，由于同時(shí)使用4-6條特異引物，所以特異性比RT-PCR更高。

2.高擴(kuò)增效率，擴(kuò)增效率可達(dá)到10E9-10E10，比PCR靈敏一個(gè)數(shù)量級(jí)，可檢測(cè)到單拷貝的RNA分子。

3.65℃左右完成RT和LAMP擴(kuò)增，不需要貴重的熱循環(huán)儀。

4.即開即用，包含了除引物和模板RNA外的所有成份，十分方便。

5.肉眼檢測(cè)擴(kuò)增結(jié)果，不需要昂貴的電泳、熒光PCR等儀器。

6.提供擴(kuò)增對(duì)照，便于在遇到困難時(shí)分析原因。

RNA提取法：試劑中的主要成分為異硫氰酸胍和苯酚，其中異硫氰酸胍可裂解細(xì)胞，促使核蛋白體的解離，使RNA與蛋白質(zhì)分離，并將RNA釋放到溶液中。當(dāng)加入氯時(shí)，它可抽提酸性的苯酚，而酸性苯酚可促使RNA進(jìn)入水相，離心后可形成水相層和有機(jī)層，這樣RNA與仍留在有機(jī)相中的蛋白質(zhì)和DNA分離開。水相層(無(wú)色)主要為RNA，有機(jī)層(黃色)主要為DNA和蛋白質(zhì)。
實(shí)驗(yàn)步驟：
1、RNA的提取;
2、反轉(zhuǎn)錄合成cDNA;
3、PCR擴(kuò)增;
4、產(chǎn)物的電泳和結(jié)果的測(cè)定。
RT-PCR是將RNA的反轉(zhuǎn)錄(RT)和cDNA的聚合酶鏈?zhǔn)綌U(kuò)增(PCR)相結(jié)合的技術(shù)。首先經(jīng)反轉(zhuǎn)錄酶的作用從RNA合成 cDNA，再以cDNA為模板，擴(kuò)增合成目的片段。RT-PCR可以一步法或兩步法的形式進(jìn)行。在兩步法RT-PCR中，每一步都在zui條件下進(jìn)行。
堿變性提取質(zhì)粒DNA是基于染色體DNA與質(zhì)粒DNA的變性與復(fù)性的差異而達(dá)到分離目的。在pH高達(dá)12.6的堿性條件下，染色體DNA的氫鍵斷裂，雙螺旋結(jié)構(gòu)解開而變性。質(zhì)粒DNA的大部分氫鍵也斷裂，但超螺旋共價(jià)閉合環(huán)狀的兩條互補(bǔ)鏈不會(huì)*分離，當(dāng)以pH4.8的NaAc高鹽緩沖液去調(diào)節(jié)其pH至中性時(shí)，變性的質(zhì)粒DNA又恢復(fù)原來(lái)的構(gòu)型，保存在溶液中，而染色體DNA不能復(fù)性而形成纏連的網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)，通過離心，染色體DNA與不穩(wěn)定的大分子RNA、蛋白質(zhì)-SDS復(fù)合物等一起沉淀下來(lái)而被除去。
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