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隨機引物法DNA探針生物素標記試劑盒

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更新時間：2018-06-12 15:10:34瀏覽次數(shù)：595次

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產(chǎn)品簡介

隨機引物法DNA探針生物素標記試劑盒本產(chǎn)品是基于Feinberg和Vogelstein發(fā)明的隨機引物標記法而開發(fā)出來的即用型DNA探針標記試劑盒，標記過程由雙鏈DNA熱變性、隨機引物與單鏈DNA結(jié)合、在Klenow DNA聚合酶催化下，引物的延伸合成DNA探針并摻入標記的核苷酸三步組成，本產(chǎn)品在上述原理的基礎(chǔ)上本產(chǎn)品的特點是：
1. 使用十聚引物，復(fù)性效率比六聚引物更高。
2. 使用無外切活性的K

詳細介紹

 

隨機引物法DNA探針生物素標記試劑盒

名稱

規(guī)格

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手冊

隨機引物法DNA探針生物素標記試劑盒

5次

1397元

 

本產(chǎn)品是基于Feinberg和Vogelstein發(fā)明的隨機引物標記法而開發(fā)出來的即用型DNA探針標記試劑盒，標記過程由雙鏈DNA熱變性、隨機引物與單鏈DNA結(jié)合、在Klenow DNA聚合酶催化下，引物的延伸合成DNA探針并摻入標記的核苷酸三步組成，本產(chǎn)品在上述原理的基礎(chǔ)上本產(chǎn)品的特點是：
1. 使用十聚引物，復(fù)性效率比六聚引物更高。
2. 使用無外切活性的Klenow exo- DNA聚合酶，已標記DNA探針不會被酶降解。
3. 快速，快1小時即可完成標記反應(yīng)。
4. 所得DNA探針比活性高（對同位素可以達到109cpm/ug DNA），檢測靈敏度高。
5. 所需模版DNA量少（只需要10ng以上即可），DNA可以是各種形狀（線狀和環(huán)狀）的、也可以是單鏈或雙鏈的，長度在100 bp以上均可。
6. 得到的探針長度在200-400 nt之間，可以用于Southern雜交、Northern雜交、原位雜交、菌落和斑點印跡雜交等。
7. 三種標記選擇，其中90603A可用于各種同位素標記和其他任何非同位素標記，但需自備標記底物；90603B和90603C可分別用于生物素和地標記。
RNA提取法：試劑中的主要成分為異硫氰酸胍和苯酚，其中異硫氰酸胍可裂解細胞，促使核蛋白體的解離，使RNA與蛋白質(zhì)分離，并將RNA釋放到溶液中。當(dāng)加入氯時，它可抽提酸性的苯酚，而酸性苯酚可促使RNA進入水相，離心后可形成水相層和有機層，這樣RNA與仍留在有機相中的蛋白質(zhì)和DNA分離開。水相層(無色)主要為RNA，有機層(黃色)主要為DNA和蛋白質(zhì)。
實驗步驟：
1、RNA的提取;
2、反轉(zhuǎn)錄合成cDNA;
3、PCR擴增;
4、產(chǎn)物的電泳和結(jié)果的測定。
RT-PCR是將RNA的反轉(zhuǎn)錄(RT)和cDNA的聚合酶鏈式擴增(PCR)相結(jié)合的技術(shù)。首先經(jīng)反轉(zhuǎn)錄酶的作用從RNA合成 cDNA，再以cDNA為模板，擴增合成目的片段。RT-PCR可以一步法或兩步法的形式進行。在兩步法RT-PCR中，每一步都在zui條件下進行。
堿變性提取質(zhì)粒DNA是基于染色體DNA與質(zhì)粒DNA的變性與復(fù)性的差異而達到分離目的。在pH高達12.6的堿性條件下，染色體DNA的氫鍵斷裂，雙螺旋結(jié)構(gòu)解開而變性。質(zhì)粒DNA的大部分氫鍵也斷裂，但超螺旋共價閉合環(huán)狀的兩條互補鏈不會*分離，當(dāng)以pH4.8的NaAc高鹽緩沖液去調(diào)節(jié)其pH至中性時，變性的質(zhì)粒DNA又恢復(fù)原來的構(gòu)型，保存在溶液中，而染色體DNA不能復(fù)性而形成纏連的網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)，通過離心，染色體DNA與不穩(wěn)定的大分子RNA、蛋白質(zhì)-SDS復(fù)合物等一起沉淀下來而被除去。
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