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elisa酶聯免疫試劑盒實驗材料及保存方法

2021-4-21  閱讀(1779)

elisa酶聯免疫試劑盒實驗材料與試劑配制:

1. 儀器與材料:酶標儀(使用前預熱30分鐘),微量加液器、吸頭、蒸餾水或去離子水,濾紙。

2. 緩沖液使用:加5ul 的緩沖液于50ul 的樣品中,如果樣品量不夠或者不確定,緩沖液和樣品的混合比例不要小于1:10即可。
混勻,靜置1小時備用(如果標本是血清或者血漿,此步驟忽略)。

3. 洗液的配制:按1:100的比例配制洗液備用。

elisa酶聯免疫試劑盒樣品收集、處理及保存

1. 細胞培養(yǎng)上清:適用于檢測體外培養(yǎng)的細胞分泌性成份。用無菌管收集細胞上清液,以1000×g離心15分鐘,收集上清。

2. 細胞:用PBS反復洗滌細胞3次,調整細胞濃度達到104
-106/ml 左右,通過反復凍融,使細胞破壞并放出細胞內成份,或者細胞超聲粉碎,離心取上清液檢測。

3. 血清:在室溫下,血液自然凝固,以1000×g離心15分鐘,取上清待測。

4. 血漿:應根據標本的要求選擇EDTA 或檸檬酸鈉作為抗凝劑,混合后靜置10-20 分鐘后,以1000×g離心15分鐘,收集上
清。

5. 體液:包括胸腹水、腦脊液,分泌物等。使用不含熱原和內毒素的離心管收集,以1000×g離心15分鐘,收集上清。

6. 組織標本:切取組織標本,稱取重量0.5mg,加入500ul 的PBS,用手工或勻漿器,或超聲破碎儀將標本勻漿,以2000-3000
rmp離心20 分鐘,收集上清進行檢測。

7. 樣品中不能含有NaN3,因NaN3 抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。

8. 保存:如果樣品不能立即檢測,應將其分裝,-70 ℃保存,避免反復冷凍。保存過程中如出現沉淀,應再次離心。血液標
本盡可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中含大量顆粒,檢測前先離心或過濾。不要在37℃或更高的溫度加熱解凍。應在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。



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