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兔瘟 RT-PCR 檢測試劑盒注意事項幾點

2021-3-23  閱讀(201)

兔瘟 RT-PCR 檢測試劑盒原理

提取樣品 RNA,在反轉錄酶的作用下,以RNA 為模板,以引物為起點合成與 RNA 模板互補的 cDNA 鏈。在 TaqDNA 聚合酶的作用下,經高溫變性、低溫退火、中溫延伸的循環(huán),使特異DN段的拷貝數(shù)放大一倍。經過多次循環(huán),*終使擴增DN段放大了數(shù)百萬倍。將擴增DN段進行電泳,經染色后,在紫外燈照射下,肉眼可見到 DN段的擴增帶。

兔瘟 RT-PCR 檢測試劑盒注意事項

1. 建議與世亨提供的柱式 RNA 核酸提取試劑盒(含電泳試劑)配套使用。

2. 實驗過程中進行陰性對照和陽性對照樣品的質量控制,需進行提取,建議提取用量分別100µL。

3. 所有接觸病料的物品均應合理處置,以免污染實驗室。

4. PCR 整個試驗分配液區(qū)、模板提取區(qū)、擴增區(qū)、電泳區(qū)。流程順序為配液區(qū)→模板提取區(qū)→擴區(qū)→電泳區(qū)。嚴禁器材和試劑倒流。

5. 所有試劑應在規(guī)定的溫度儲存。-20℃保存的各試劑管使用前應*融化,8000rpm 離心15s,使液體全部沉于管底,放于冰盒中,吸取液體時移液器吸頭盡量在液體表面層吸取,使用后立即放回-20℃。

6. 注意防止試劑盒組分受污染。不要使用超過有效期限的試劑,試劑盒之間的成分不要混用。

7. 嚴格遵守操作說明可以獲得的結果。操作過程中移液、定時等全部過程必須精確。

8. 反應體系應在特定配液區(qū)或者超凈工作臺中配制,整個實驗過程嚴格控制污染。

9. 反復凍融試劑將減低檢測靈敏度,本試劑盒應在 3 次內用完。



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