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細(xì)胞培養(yǎng)

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ATCC細(xì)胞技術(shù)步驟方法

2021-1-27  閱讀(262)

ATCC細(xì)胞方法:

 1.細(xì)菌污染 

    細(xì)菌污染是實驗室細(xì)胞培養(yǎng)中常見的污染,即使在細(xì)胞培養(yǎng)液中加入了抗菌素,也可能因為操作不慎而引起污染。常見的有革蘭氏陽性菌,如枯草桿菌以及大腸桿菌、假單胞菌等革蘭氏陰性菌,其中又以白色葡萄球菌較常見。 

 培養(yǎng)細(xì)胞受細(xì)菌污染后,會出現(xiàn)培養(yǎng)液變混濁,pH改變。污染后細(xì)胞發(fā)生病理改變,胞內(nèi)顆粒增多、增粗,變圓脫落死亡。 

 2.真菌污染 

    真菌污染是細(xì)胞培養(yǎng)過程中常見的一種,常見的真菌有煙曲霉、黑曲菌、孔子霉、毛霉菌、白色念珠菌和酵母菌。 

 培養(yǎng)細(xì)胞受真菌污染后,可見培養(yǎng)液中漂浮著白色或淺黃色的小點,有的散在生長,培養(yǎng)液一般不發(fā)生混濁;倒置顯微鏡下可見絲狀、管狀或樹枝狀的菌絲縱橫交錯在細(xì)胞之間或培養(yǎng)基中,有的呈鏈狀排列。 

 真菌污染后,細(xì)胞生長變慢,但由于營養(yǎng)耗盡及毒性作用而使細(xì)胞脫落死亡。 

 3.支原體污染 

    支原體是介于細(xì)菌與病毒之間能獨立生活的微生物,小直徑0.2μm,一般過濾除菌無法去除它,光鏡下難以看清它的形態(tài)結(jié)構(gòu)。開始不易發(fā)現(xiàn),能在偏堿條件下生存,對有抗藥性。多吸附于細(xì)胞表面或散在于細(xì)胞之間。 

 培養(yǎng)細(xì)胞受支原體污染后,部分敏感細(xì)胞可見細(xì)胞生長增殖變慢,部分細(xì)胞變圓,從瓶壁脫落。但多數(shù)細(xì)胞污染后無明顯變化,或略有變化,若不及時處理,還會產(chǎn)生交叉污染。 

  4.病毒污染 

    組織細(xì)胞培養(yǎng)過程中,如果沒有除去潛在的病毒,就會產(chǎn)生病毒污染。目前,從原代猴腎細(xì)胞的培養(yǎng)中已發(fā)現(xiàn)不少于20種血清性病毒。

ATCC細(xì)胞?技術(shù)步驟:

1、取材

細(xì)胞株培養(yǎng)的材料主要來源于外科手術(shù)或活檢瘤組織,取材時避免用壞死組織,要挑選瘤細(xì)胞集中和活力較好的部位,瘤性轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)或胸腹水是較好的培養(yǎng)材料。取材后盡快培養(yǎng),因故不能立即培養(yǎng)者,可凍存。細(xì)胞株的培養(yǎng)方法及凍存方法同前述正常組織。

2、成纖維細(xì)胞排除

在細(xì)胞株培養(yǎng)中?;祀s有一些成纖維細(xì)胞,培養(yǎng)時能與瘤細(xì)胞同時生長,并常壓過癌細(xì)胞,導(dǎo)致癌細(xì)胞生長受阻以至消失,應(yīng)仔細(xì)排除。排除方法常有:機械刮除法、反復(fù)貼壁法、消化排除法、膠原酶消化法等。

3、提高細(xì)胞培養(yǎng)存活率和生長率

根據(jù)實驗經(jīng)驗,細(xì)胞株要經(jīng)過對新環(huán)境的適應(yīng)才能生長,因此不能局限于一般培養(yǎng)法,須采用一些特殊措施。如:用適宜底物,鼠尾膠原底層及飼細(xì)胞底層等。用細(xì)胞生長因子,根據(jù)細(xì)胞種類不同選用不同的促細(xì)胞生長因子,如胰島素、雌激素等。也可以考慮動物媒介培養(yǎng)。 



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