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有關(guān)原代細(xì)胞的培養(yǎng)方法
2020-5-18 閱讀(260)
1、原代細(xì)胞組織塊培養(yǎng)法
(1)按照前述方法選材，將成或切成1mm3巨細(xì)的小塊，并參與少量培養(yǎng)基使組織濕潤。
(2)將小塊均勻涂布于瓶壁，每小塊距離0.2 cm~0.5cm，一般在25mL培養(yǎng)瓶(底面積為17.5cm2)可接種20～30小塊為宜,小塊放置后,輕輕翻轉(zhuǎn)培養(yǎng)瓶,使瓶底朝上,然后于瓶內(nèi)參與適量培養(yǎng)基蓋好瓶塞,將瓶傾斜放置在37℃溫箱內(nèi)。
(3)培養(yǎng)2~4小時，待小塊貼附后，將培養(yǎng)瓶緩慢翻轉(zhuǎn)平放，靜置培養(yǎng)，動作要輕，嚴(yán)禁搖擺和來回振蕩，以防因為激動而使小塊漂起而形成培養(yǎng)失利，若組織塊不易貼壁可預(yù)先在瓶壁涂一薄層血清、胎汁或鼠尾膠原等。
2.消化培養(yǎng)法
該方法是選用前述的消化松散法，原代細(xì)胞將阻止細(xì)胞生長的細(xì)胞間質(zhì)（包含基質(zhì)、纖維等）去除，使細(xì)胞松散形成細(xì)胞懸液，然后分瓶培養(yǎng)。
3.懸浮細(xì)胞培養(yǎng)法
關(guān)于懸浮生長的細(xì)胞，如白血病細(xì)胞、骨髓細(xì)胞、胸水和腹水中的癌細(xì)胞和**細(xì)胞無需消化，可選用低速離心別離，直接培養(yǎng)，或經(jīng)細(xì)胞分層液別離后接種培養(yǎng)。
