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幼蚊細胞；C6/36說明書
2019-8-15 閱讀(356)
幼蚊細胞；C6/36說明書
時光匆匆消減了歲月，換來了成功!并肩奮斗跨越了高考，升入了大學(xué)!為了夢想不斷前行，定要闖下一片大好前程!兄弟，拼吧!接下來介紹 幼蚊細胞；C6/36說明書.
冷凍保存方法一：冷凍管置于4℃300分鐘→(-20℃30分鐘*)→-80℃16~18小時(或隔夜)→液氮槽儲存。
冷凍保存方法二：冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機中每分鐘降1-3℃至–80℃以下，再放入液氮槽期儲存。-20℃不可超過1小時，以防止冰晶過大，造成細胞大量死亡，也可跳過此步驟直接放入-80℃冰箱中，但存活率稍微降低一些。
幼蚊細胞；C6/36說明書細胞傳代培養(yǎng)
一、原理 細胞在培養(yǎng)瓶長成致密單層后，已基本上飽和，為使細胞能繼續(xù)生長，同時也將細胞數(shù)量擴大，就必須進行傳代（再培養(yǎng)）。 傳代培養(yǎng)也是一種將細胞種保存下去的方法。同時也是利用培養(yǎng)細胞進行各種實驗的必經(jīng)過程。懸浮型細胞直接分瓶就可以，而貼壁細胞需經(jīng)消化后才能分 瓶。
二、材料和試劑 1、細胞：貼壁細胞株 2、試劑：0.25%、1640培養(yǎng)基（含10%小牛血清） 3、儀器和器材：倒置顯微鏡，培養(yǎng)箱、培養(yǎng)瓶、吸管、廢液缸等
三、操作步驟 1、將長滿細胞的培養(yǎng)瓶中原來的培養(yǎng)液棄去。
2、加入0.5—1ml 0.25%溶液，使瓶底細胞都浸入溶液中。
3、瓶口塞好橡皮塞，放在倒置鏡下觀察細胞。隨著時間的推移，原貼壁的細胞逐漸趨于圓形，在還未漂起時將棄去，加入10ml培養(yǎng)液終止消化。 觀察消化也可以用肉眼，當見到瓶底發(fā)白并出現(xiàn)細針孔空隙時終止消化。一般室溫消化時間約為1—3分鐘。
4、用吸管將貼壁的細胞吹打成懸液，分到另外兩到三瓶中，實踐培養(yǎng)液塞好橡皮塞，置37℃下繼續(xù)培養(yǎng)。第二天觀察貼壁生長情況。 附：消化液配制方法： 稱取0.25克蛋白酶（活力為1：250），加入100ml無Ca2+、Mg2+的Hank’s液溶解，濾器過濾除菌，4℃保存，用前可在37℃下回溫。
