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上海邦景實(shí)業(yè)有限公司
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人胚腎細(xì)胞實(shí)驗(yàn)中血清樣本及反應(yīng)試劑操作標(biāo)準(zhǔn)
2018-4-23 閱讀(1333)
人胚腎細(xì)胞實(shí)驗(yàn)中血清樣本及反應(yīng)試劑操作標(biāo)準(zhǔn)
在現(xiàn)在的ELISA商品試劑盒中，血清樣本的加入幾乎是*的要使用微量加樣器加入樣本的步驟。使用微量加樣器加樣必須注意的關(guān)鍵點(diǎn)是：加樣不可太快，要避免加在孔壁上部，不可濺出和產(chǎn)生氣泡。加樣太快，無(wú)法保證微量加樣的準(zhǔn)確性和均一性。加在孔壁上部的非包被區(qū)，易導(dǎo)致非特異吸附。濺出會(huì)對(duì)鄰近孔產(chǎn)生污染。出現(xiàn)氣泡則反應(yīng)液界面有差異。試劑的加入在國(guó)產(chǎn)試劑盒中基本上均是從滴瓶中滴加，除了要注意滴加的角度外，滴加的速度也很重要，滴加太快，很容易出現(xiàn)重復(fù)滴加或加在兩孔之間的現(xiàn)象，這樣就會(huì)在孔內(nèi)的非包被區(qū)出現(xiàn)非特異吸附，從而引起非特異顯色。所以，有時(shí)候一份標(biāo)本用相同的試劑盒這次測(cè)定為陽(yáng)性，下次測(cè)定為陰性，往往就是上述加樣及試劑的錯(cuò)誤所致。
標(biāo)準(zhǔn)操作要點(diǎn)
1. 標(biāo)本的采取和保存
大部分ELISA 檢測(cè)均以血清為標(biāo)本。血清標(biāo)本可按常規(guī)方法采集，應(yīng)注意避免溶血，紅細(xì)胞溶解時(shí)會(huì)釋放出具有過氧化物酶活性的物質(zhì)，以HRP 為標(biāo)記的ELISA 測(cè)定中，溶血標(biāo)本可能會(huì)增加非特異性顯色。血清標(biāo)本宜在新鮮時(shí)檢測(cè)。如有細(xì)菌污染，菌體中可能含有內(nèi)源性HRP，也會(huì)產(chǎn)生假陽(yáng)性反應(yīng)。一般說來(lái)，在5 天內(nèi)測(cè)定的血清標(biāo)本可放置于4℃，標(biāo)本在冰箱中保存時(shí)間過長(zhǎng)導(dǎo)致血清IgG 聚合，使間接法的試劑本底加深。超過一周測(cè)定的需－20℃保存。凍結(jié)血清融解后，蛋白質(zhì)局部濃縮，分布不均，應(yīng)充分混勻并避免產(chǎn)生氣泡?；鞚峄蛴谐恋淼难鍢?biāo)本應(yīng)先離心或過濾，澄清后再檢測(cè)。反復(fù)凍融會(huì)使抗體效價(jià)跌落，所以測(cè)抗體的血清標(biāo)本如需保存作多次檢測(cè)，宜少量分裝冰存。保存血清自采集時(shí)就應(yīng)注意無(wú)菌操作，也可加入適當(dāng)防腐劑?？鼓?的標(biāo)本因纖維蛋白原的干擾而造成假陽(yáng)性，建議盡量不用抗凝血尤其是肝素抗凝劑。
2.加樣
加樣時(shí)應(yīng)將所加物加在ELISA 板孔的底部，避免加在孔壁上部，并注意不可濺出。
3.保溫
在建立ELISA 方法作反應(yīng)動(dòng)力學(xué)研究時(shí)，實(shí)驗(yàn)表明，兩次抗原抗體反應(yīng)一般在37℃經(jīng)
1-2 小時(shí)，產(chǎn)物的生成可達(dá)。為避免蒸發(fā)，板上應(yīng)加蓋，也可用塑料貼封紙或保鮮膜覆蓋板孔，反應(yīng)板不宜疊放，以保證各板的溫度都能迅速平衡。應(yīng)注意溫育的溫度和時(shí)間應(yīng)按規(guī)定力求準(zhǔn)確。由于公司的試劑盒溫育是在空氣浴中完成，采用水浴會(huì)造成值偏高或花板。另外溫育中還有邊緣效應(yīng)，邊上的值會(huì)偏高，建議為了客觀的判斷結(jié)果，將質(zhì)控放在非邊緣位置。
4.洗滌
洗滌在ELISA 過程中雖不是一個(gè)反應(yīng)步驟，但卻決定著實(shí)驗(yàn)的成敗。ELSIA 就是靠洗滌來(lái)達(dá)到分離游離的和結(jié)合的酶標(biāo)記物的目的。通過洗滌以清除殘留在板孔中沒能與固相抗原或抗體結(jié)合的物質(zhì)，以及在反應(yīng)過程中非特異性地吸附于固相載體的干擾物質(zhì)。聚苯乙烯等塑料對(duì)蛋白質(zhì)的吸附是普遍性的，而在洗滌時(shí)應(yīng)把這種非特異性吸附的干擾物質(zhì)洗滌下來(lái)。可以說在ELISA 操作中，洗滌是zui主要的關(guān)鍵技術(shù)，應(yīng)引起操作者的高度重視，操作者應(yīng)嚴(yán)格按要求洗滌，不得馬虎。
人胚腎細(xì)胞HIPEpiC cDNA 人虹膜色素上皮細(xì)胞cDNA 20 reactions
HConF cDNA 人結(jié)膜成纖維細(xì)胞cDNA 20 reactions
HNPCEpiC cDNA 人無(wú)色素睫狀上皮細(xì)胞 cDNA 20 reactions
HTMC cDNA 人小梁網(wǎng)細(xì)胞cDNA 20 reactions
HAmEpiC cDNA 人羊膜上皮細(xì)胞cDNA 20 reactions
HVT cDNA 人滋養(yǎng)層絨毛細(xì)胞cDNA 20 reactions
HVMF cDNA 人絨毛間葉成纖維細(xì)胞cDNA 20 reactions
HPA-v cDNA 人前脂肪細(xì)胞-內(nèi)臟cDNA 20 reactions
HPA-s cDNA 人前脂肪細(xì)胞-皮下cDNA 20 reactions
HMSC-bm cDNA 人間充質(zhì)干細(xì)胞(骨髓)cDNA 20 reactions
HMSC-ad cDNA 人間充質(zhì)干細(xì)胞(脂肪)cDNA 20 reactions
HMSC-hp cDNA 人間充質(zhì)干細(xì)胞(肝臟)cDNA 20 reactions
HUMSC cDNA 人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞cDNA 20 reactions
HPMSC cDNA 人肺間充質(zhì)干細(xì)胞cDNA 20 reactions
HMEpiC cDNA 上皮細(xì)胞cDNA 20 reactions
HMF cDNA 成纖維細(xì)胞cDNA 20 reactions
HUVEC cDNA 人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞cDNA 20 reactions
HUAEC cDNA 人臍動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞cDNA 20 reactions
HUVSMC cDNA 人臍靜脈平滑肌細(xì)胞cDNA 20 reactions
HUASMC cDNA 人臍動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞cDNA 20 reactions
HBMEC tRNA 人腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞總RNA 10 µg
HBVSMC tDNA 人腦血管平滑肌細(xì)胞總RNA 10 µg
HBVC tRNA 人腦血管周細(xì)胞總RNA 10 µg
HCPEC tRNA 人脈絡(luò)叢內(nèi)皮細(xì)胞總RNA 10 µg
HCPEpiC tRNA 人脈絡(luò)叢上皮細(xì)胞總RNA 10 µg
HCPF tRNA 人脈絡(luò)叢成纖維細(xì)胞總RNA 10 µg
HMC tRNA 人腦膜細(xì)胞總RNA 10 µg
HN tRNA 人神經(jīng)元總RNA 10 µg
HCGC tRNA 人小腦顆粒細(xì)胞總RNA 10 µg
HN-h tRNA 人海馬趾神經(jīng)細(xì)胞總RNA 10 µg
HOPC tRNA 人少突膠質(zhì)前體細(xì)胞總RNA 10 µg
HOPC-os tRNA 人少突膠質(zhì)前體細(xì)胞(懸浮生長(zhǎng))總RNA 10 µg
HSC tRNA 人雪旺細(xì)胞總RNA 10 µg人胚腎細(xì)胞
