 |
上海邦景實(shí)業(yè)有限公司
主營(yíng)產(chǎn)品： 進(jìn)口elisa試劑盒，細(xì)胞株，細(xì)胞系，菌種 |
會(huì)員.png)
8
聯(lián)系電話
15000017673
公司信息
- 聯(lián)系人：
- 劉小姐
- 電話：
- 021-52960952
- 手機(jī)：
- 15000017673
- 售后電話：
- 15000017673
- 傳真：
- 021-57690166
- 地址：
- 上海市閔行區(qū)碧泉路36弄銀宵大廈
- 郵編：
- 200000
- 網(wǎng)址：
- www.bhsy-e.com/
PCR反應(yīng)體系內(nèi)部因素
2025-5-6 閱讀(14)
一個(gè)PCR反應(yīng)過程分為很多的步驟，包括樣本采集，運(yùn)輸，核酸提取，qpcr擴(kuò)增等步驟，因此結(jié)果會(huì)受到很多因素的影響，本文將常見因素分為內(nèi)部因素和外部因素，內(nèi)部因素是指正常試劑體系中的成分，外部因素是指環(huán)境或者樣本帶入的因素。
體系內(nèi)部因素:
1、引物：長(zhǎng)度、擴(kuò)增跨度、特異性等因素；
2、酶及其濃度：酶濃度過高可引起非特異性擴(kuò)增，濃度過低則合成產(chǎn)物量減少；
3、dNTP的質(zhì)量與濃度：dNTP溶液呈酸性，一般配置成體系需將其調(diào)節(jié)至7.0-7.5，正常情況下4種dNTP的濃度應(yīng)該相等，如果其中某一種過高就會(huì)引起錯(cuò)配，濃度過低又會(huì)引起PCR產(chǎn)物的產(chǎn)量。不過目前使用的都是商品化配置好的預(yù)混液體系；
4、模板核酸：模板核酸的量和純度，是PCR成敗與否的關(guān)鍵環(huán)節(jié)之一，對(duì)于RNA模板更要注意RNA的降解；
5、Mg2+濃度：主要影響PCR擴(kuò)增的特異性和產(chǎn)量，Mg2+濃度過高，反應(yīng)特異性降低，出現(xiàn)非特異性擴(kuò)增，濃度過低會(huì)降低Taq 酶的活性，使反應(yīng)產(chǎn)物減少；
6、溫度與時(shí)間的設(shè)置：變性溫度與時(shí)間、退火溫度與時(shí)間、延伸溫度與時(shí)間；
7、循環(huán)次數(shù)：循環(huán)次數(shù)決定PCR擴(kuò)增程度，PCR循環(huán)次數(shù)主要取決于模板DNA的濃度。一般溫度循環(huán)次數(shù)在30-40次之間，循環(huán)次數(shù)越多，非特異性產(chǎn)物的量就越多。
