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防止PCR實驗污染的方法

2025-3-11  閱讀(60)

  進行PCR操作時,操作人員應(yīng)該嚴格遵守一些操作規(guī)程,-大程度地降低可能出現(xiàn)的PCR污染或杜絕污染的出現(xiàn)。
 
  一、劃分操作區(qū):目前,普通PCR尚不能做到單人單管,實現(xiàn)全閉管操作,但無論是否能夠達到單人單管,均要求實驗操作在三個不同的區(qū)域內(nèi)進行,PCR的前處理和后處理要在不同的隔離區(qū)內(nèi)進行:
 
  l 試劑準備區(qū)。
 
  l 標本制備區(qū)。
 
  l PCR擴增區(qū)及分析區(qū)。
 
  切記:任何一間的產(chǎn)物及器材不要拿到其他兩個工作區(qū)。
 
  二、分裝試劑:PCR擴增所需要的試劑均應(yīng)在生物安全柜、裝有紫外燈的超凈工作臺或負壓工作臺配制和分裝。所有的加樣器和吸頭需固定放于其中,不能用來吸取擴增后的DNA和其他來源的DNA:
 
  n PCR用水應(yīng)為高壓的雙蒸水;
 
  n 引物和dNTP用高壓的雙蒸水在無PCR擴增產(chǎn)物區(qū)配制;
 
  引物和dNTP應(yīng)分裝儲存,分裝時應(yīng)標明時間,以備發(fā)生污染時查找原因。
 


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