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抗體穩(wěn)定性好原因及檢測分析
2025-2-24 閱讀(50)
抗體應(yīng)該是蛋白中屬于比較穩(wěn)定的，其Tm值基本上在70度左右。但是這只是跟其它的蛋白相比，作為生物大分子蛋白的本身屬性，抗體還是存在不穩(wěn)定性，會失活降解。目前抗體在研發(fā)以及醫(yī)療領(lǐng)域廣泛應(yīng)用，如若其活性變化將造成不可預知的后果，因此完善的抗體穩(wěn)定性的檢測方法是目前抗體市場bu可或缺，通過檢測確定其可用的條件以及有效期限。
抗體在室溫、37℃保存與-20℃保存具有一樣的活性與穩(wěn)定性。之所以這種抗體具有這樣良好的穩(wěn)定性，主要原因有四個方面：
1. 抗體純度
高純度的抗體產(chǎn)品，去除了包括各種蛋白酶在內(nèi)的雜質(zhì)，保證了抗體的穩(wěn)定性。采用先進的抗體純化技術(shù)，確?？贵w產(chǎn)品的高純度，保障其抗體產(chǎn)品的穩(wěn)定性。
2. 抗體濃度
高濃度的抗體產(chǎn)品可減少容器表面吸附造成的物質(zhì)損失。撫生抗體產(chǎn)品中，93%的濃度大于0.5mg/ml?？贵w產(chǎn)品濃度普遍大于業(yè)內(nèi)水平。
3. 抗體的穩(wěn)定性是自然界長期進化的結(jié)果
抗體是免疫系統(tǒng)中最重要的分子之一，其穩(wěn)定性是自然進化篩選的結(jié)果。在眾多物種中，抗體分子形成了保守而穩(wěn)定的結(jié)構(gòu)，分子中70% 氨基酸殘基(免疫球蛋白結(jié)構(gòu)域)以beta片層(beta-sheet)形式堆疊，形成緊密并能耐受蛋白酶作用的“三明治"結(jié)構(gòu)，輕鏈和重鏈通過保守的二硫鍵形成具有三個結(jié)構(gòu)域的免疫球蛋白，大大提高了分子本身的穩(wěn)定性。
4. 抗體分子的高Tm值
有數(shù)據(jù)表明，在70℃時抗體分子才開始明顯地去折疊(unfold)，而這一過程之前的變化也具有相當?shù)目赡嫘?。也就是說，在室溫下，甚至短時間溫度達到50-60度，抗體分子都能維持正確折疊，保持應(yīng)有的活性。
目前主要有3種檢測抗體穩(wěn)定性的方法：
1、長期實驗亦可叫Real time：將抗體存放在實際保存溫度，在不同的時間點取出后檢測其上述抗體特性，如2個月檢測一次，直至抗體不再具有相應(yīng)產(chǎn)品特性，此期限則為其有效的使用和保存期限。
2、加速穩(wěn)定實驗：將抗體放入高溫存儲條件，如室溫、37℃等，亦是在不同的時間點取出后檢測其上述抗體特性，一般是1天檢測一次，直至抗體不再具有相應(yīng)產(chǎn)品特性，根據(jù)其抗體在高溫失活的期限推算其在實際存放條件下的保存和使用期限。
3、反復凍融：凍融對抗體活性會有較大的影響，因此可通過反復凍融來檢測抗體的穩(wěn)定性，凍融一次檢測一次，直至抗體不再具有相應(yīng)產(chǎn)品特性。
此外，嚴格情況下還需要進行運輸條件的模擬，測試抗體在其運輸過程中的穩(wěn)定性。
對于長期實驗不一定要做到抗體失活為止，但加速穩(wěn)定和反復凍融一般要求是要做到抗體失活為止。
