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細胞轉(zhuǎn)染實驗一般過程步驟

2023-12-4  閱讀(250)

    轉(zhuǎn)染,是將外源性基因?qū)爰毎麅?nèi)的一種專門技術(shù)。隨著基因與蛋白功能研究的深入,轉(zhuǎn)染目前已成為實驗室工作中經(jīng)常涉及的基本方法。細胞轉(zhuǎn)染是指將外源分子如DNA,RNA等導入真核細胞的技術(shù)。應(yīng)用在研究基因功能、調(diào)控基因表達、突變分析和蛋白質(zhì)生產(chǎn)等生物學試驗中。

細胞轉(zhuǎn)染實驗一般過程步驟:

1. 轉(zhuǎn)染試劑的準備

① 將400ul去核酸酶水加入管中,震蕩10秒鐘,溶解脂狀物。

② 震蕩后將試劑放在-20攝氏度保存,使用前還需震蕩。 

2. 選擇合適的混合比例(1:1-1:2/脂質(zhì)體 體積:DNA質(zhì)量)來轉(zhuǎn)染細胞。在一個轉(zhuǎn)染管中加入合適體積的無血清培養(yǎng)基。加入合適質(zhì)量的MyoD或者EGFP的DNA,震蕩后在加入合適體積的轉(zhuǎn)染試劑,再次震蕩。

3. 將混合液在室溫放置10―15分鐘。

4. 吸去培養(yǎng)板中的培養(yǎng)基,用PBS或者無血清培養(yǎng)基清洗一次。

5. 加入混合液,將細胞放回培養(yǎng)箱中培養(yǎng)一個小時。

6. 到時后,根據(jù)細胞種類決定是否移除混合液,之后加入*培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)24-48小時。







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