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ELISA實(shí)驗(yàn)出現(xiàn)假陽(yáng)性結(jié)果的操作分析

2023-3-20  閱讀(153)

ELISA實(shí)驗(yàn)中造成假陽(yáng)性的主要四點(diǎn)錯(cuò)誤操作:

1、加樣

對(duì)于間接ELISA標(biāo)本一般都要進(jìn)行稀釋,如果加樣不準(zhǔn)就會(huì)造成誤差,尤其當(dāng)稀釋倍數(shù)大時(shí),很小的誤差,會(huì)導(dǎo)致較大的相對(duì)誤差,使陰性(或弱陽(yáng)性)標(biāo)本呈陽(yáng)性(或陰性)。加樣時(shí)應(yīng)將所加物加在ELISA板孔的底部,避免加在孔壁上部,并注意不可濺出,不可產(chǎn)生氣泡。目前,大部分血站都已使用全自動(dòng)酶免加樣系統(tǒng)處理標(biāo)本,可較好地避免以上誤差。

2、洗滌

在ELISA中正確的洗滌是保證得到可重復(fù)結(jié)果的關(guān)健一步,應(yīng)引起操作者重視。無(wú)論是手工操作還是機(jī)器操作,得出不正確的結(jié)果常與不正確的洗滌有關(guān),ELISA就是靠洗滌來達(dá)到分離游離和結(jié)合的酶標(biāo)記物的目的。通過洗滌以消除殘留在板孔中沒能與固體抗原或抗體結(jié)合的物質(zhì),以及在反應(yīng)過程中非特異性吸附于固相載體的干擾物質(zhì)。

3、 溫育

每種試劑都有其zui合適的反應(yīng)模式,其中溫度和溫育時(shí)間控制是重要因素。因孵育溫度高,反應(yīng)時(shí)間長(zhǎng),會(huì)造成整板本底高,陽(yáng)性率高。溫育一般用濕盒或水浴,反應(yīng)板不宜疊放,以保證各板溫度都能迅速平衡,為避免蒸發(fā),板上應(yīng)加蓋。

4、酶標(biāo)儀判讀

作為記錄測(cè)定結(jié)果的儀器,酶標(biāo)儀的性能穩(wěn)定與否,決定結(jié)果的可靠度。首先酶標(biāo)儀應(yīng)定期進(jìn)行保養(yǎng),對(duì)濾光片要定期校正;其次酶標(biāo)儀波長(zhǎng)設(shè)置要正確,使用雙波長(zhǎng),一個(gè)檢測(cè)波長(zhǎng),一個(gè)參比波長(zhǎng),以消除微孔板底部劃痕、不平、指印或液面高度差異造成的光干擾。此外,在用酶標(biāo)儀讀數(shù)時(shí)先擦試微孔板底部并壓平板條。由于各種酶標(biāo)儀性能有所不同,使用中應(yīng)詳細(xì)閱讀說明書

綜上所述,由于酶聯(lián)免疫吸附技術(shù)目前在技術(shù)上缺乏標(biāo)準(zhǔn)化,由于受方法學(xué)及技術(shù)條件的限制,在酶聯(lián)吸附測(cè)定中有時(shí)不可避免的會(huì)出現(xiàn)一定的非特異性,但我們可以通過以上措施把非特異性顯色降至zui低限底,從而提高檢測(cè)的特異性,并得到更準(zhǔn)確、可靠的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。




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