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上海邦景實(shí)業(yè)有限公司
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血清質(zhì)量的鑒定一般包括的兩方面
2022-11-7 閱讀(175)
血清的質(zhì)量高低取決于兩方面因素：一是取材對(duì)象，二是取材過(guò)程。用于取材的動(dòng)物應(yīng)健康無(wú)病并且在zhi 定的出生天數(shù)之內(nèi)，取材過(guò)程應(yīng)嚴(yán)格按照操作規(guī)程執(zhí)行，制備出的血清要經(jīng)過(guò)嚴(yán)格的質(zhì)量鑒定。血清質(zhì)量的鑒定一般包括以下幾個(gè)方面：
1、理化性質(zhì)：
如滲透壓、pH值、蛋白電泳圖譜、蛋白含量、激素水平、內(nèi)毒素等。蛋白含量包括血清總蛋白含量（不低于35-45g/L）、球蛋白含量（應(yīng)小于20g/L)、血紅蛋白含量等。其中球蛋白含量是一項(xiàng)非常重要的指標(biāo)，血清中球蛋白主要是抗體，球蛋白含量越低血清質(zhì)量越高。血紅蛋白也是越低越好。
2、微生物檢測(cè)：
包括細(xì)菌、真菌、支原體、病毒等。特別是對(duì)支原體、病毒的檢測(cè)，支原體是一種很小的微生物，可通過(guò)孔徑22u的濾膜。支原體、病毒污染在光學(xué)顯微鏡下難于察覺(jué)，細(xì)胞也能生長(zhǎng)繁殖，但會(huì)影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。檢測(cè)支原體的方法很多，如培養(yǎng)法、PCR法、熒光染色法、電鏡觀察法等。
促生長(zhǎng)效果：這是血清重要的特性之一，應(yīng)當(dāng)以培養(yǎng)的細(xì)胞來(lái)檢測(cè)。有兩種方法：克隆形成率、貼瓶率測(cè)定法和連續(xù)傳代培養(yǎng)法。
1）、克隆形成率測(cè)定：
一般以懸浮生長(zhǎng)的細(xì)胞為培養(yǎng)對(duì)象，按有限稀釋法做克隆化培養(yǎng)，將不同批號(hào)的血清配制成不同濃度的培養(yǎng)基，細(xì)胞也稀釋成不同濃度，接種到96孔板，每孔200ul，培養(yǎng)一定時(shí)間，統(tǒng)計(jì)有克隆生長(zhǎng)的孔，計(jì)算出百分比，再與對(duì)照的標(biāo)準(zhǔn)血清相比較，就可看出不同批號(hào)血清間的區(qū)別。比較低的濃度，更能觀察出血清質(zhì)量間的細(xì)微差別。
2）、貼瓶率測(cè)定：
是以貼壁細(xì)胞為培養(yǎng)對(duì)象，將細(xì)胞稀釋至低密度，接種至平皿，每皿200或100個(gè)細(xì)胞，以不同濃度的血清培養(yǎng)基培養(yǎng)，培養(yǎng)一定時(shí)間后棄培養(yǎng)基，染色后統(tǒng)計(jì)集落數(shù)，計(jì)算出集落數(shù)占接種細(xì)胞數(shù)的百分比，同樣再與標(biāo)準(zhǔn)血清比較，判斷血清質(zhì)量高低。
3 、連續(xù)傳代培養(yǎng)法：
是將細(xì)胞培養(yǎng)于3個(gè)一定體積的培養(yǎng)瓶中，待測(cè)血清配制為5％濃度，一般于第七天收集細(xì)胞，計(jì)數(shù)，取平均值，中間可以更換一次培養(yǎng)基。連續(xù)測(cè)試三個(gè)周期以上，觀察細(xì)胞生長(zhǎng)狀況，并將每次的計(jì)數(shù)結(jié)果與標(biāo)準(zhǔn)血清的測(cè)試結(jié)果比較。
對(duì)于使用者，判斷血清質(zhì)量先從外觀入手。好的血清應(yīng)該是透明清亮，土黃色或棕黃色，無(wú)沉淀或極少沉淀，比較粘稠。如發(fā)現(xiàn)血清渾濁、不透明、含許多沉淀物，說(shuō)明血清污染或血清中的蛋白質(zhì)變性；若血清呈棕紅色，說(shuō)明血清中的血紅蛋白含量太高，取材時(shí)有溶血現(xiàn)象；如果搖晃時(shí)感覺(jué)液體稀薄，說(shuō)明血清中摻入的生理鹽水太多。如果要進(jìn)一步了解血清的質(zhì)量，則應(yīng)連續(xù)培養(yǎng)某些細(xì)胞，觀察細(xì)胞生長(zhǎng)狀況。
