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干粉培養(yǎng)基原倍液的配制過程及注意點

2022-7-25  閱讀(439)

細胞培養(yǎng)基既是培養(yǎng)細胞中供給細胞營養(yǎng)和促使細胞生殖增殖的基礎物質(zhì),也是培養(yǎng)細胞生長和繁殖的生存環(huán)境?,F(xiàn)在詳細了解干粉培養(yǎng)基原倍液的配制:

一、配制過濾除菌的細胞培養(yǎng)基

1、 閱讀培養(yǎng)基使用說明,確定需要添加何種添加劑(如NaHCO3、L-谷an酰胺、丙酮酸鈉、HEPES等)。

2、根據(jù)所需將培養(yǎng)基全部倒入一容器中,用少量注射用水(20℃~30℃)將袋內(nèi)殘留培養(yǎng)基洗下,并入容器。加注射用水至總體積的95%,輕微攪拌溶解。

3、 加入規(guī)定量的碳酸氫na及所要添加的物質(zhì)。

4、 輕微攪拌溶解,加注射用水至規(guī)定體積。

5、 用1 mol / L 氫氧化鈉溶液或 1 mol / L 鹽酸溶液調(diào)pH至所需值。

6、 用0.22 μm濾膜正壓過濾除菌。

7、溶液應在2℃-8℃下避光保存。

具體使用方法參照培養(yǎng)基包裝袋上的說明書。

二、配制可高壓滅菌細胞培養(yǎng)基

1、根據(jù)所需將培養(yǎng)基全部倒入一容器中,用少量注射用水(20℃~30℃)將袋內(nèi)殘留培養(yǎng)基洗下,并入容器。加注射用水至總體積的95%,輕微攪拌溶解

2、在121℃、15psi下滅菌15分鐘。

3、 待溶液冷卻至室溫,加入無菌0.2 mol / L L-an酰胺液規(guī)定體積、無菌7.5%(w/v)碳酸氫na溶液規(guī)定體積,加注射用水(20℃~30℃)至規(guī)定體積,混勻。

4、如果必要,用1 mol / L 氫氧化鈉溶液或 1 mol / L 鹽酸溶液調(diào)pH至所需值。

5、溶液應在2℃-8℃下避光保存。

具體使用方法參照培養(yǎng)基包裝袋上的說明書

注意事項:

1、 細胞培養(yǎng)用水一般為三蒸水(經(jīng)石英蒸餾器蒸餾)或超純水,醫(yī)藥上一般為注射用水。

2、 建議盡量選擇與所用量相匹配的包裝一次使用,因為包裝一旦打開,組分可能會變質(zhì)或因受潮而結團。

3、 溶解干粉培養(yǎng)基時先加入終體積90%-95%的培養(yǎng)用水,添加劑加完后再補足。

4、 如需添加的組分較多時,某一組分*溶解后,再添加另一組分。

5、 待培養(yǎng)基*溶解后再加入碳酸氫na,以免產(chǎn)生沉淀。

6、 所有成分*溶解后,培養(yǎng)基應立即過濾或高壓除菌,以免產(chǎn)生沉淀或有微生物污染。

7、 在過濾除菌時,一般情況下應調(diào)pH比所需值低0.1~0.2個單位,因過濾除菌后,pH值會升高約0.2。

8、在細胞培養(yǎng)過程中,建議不加或加少量的抗生素,如血清的濃度較低則所加抗生素的量也要相應降低一些。

9、 建議用1 N HCl或1 N NaOH來調(diào)節(jié)培養(yǎng)基的pH,因為用碳酸氫na來調(diào)對培養(yǎng)液的滲透壓影響比較大。






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