喹諾酮類藥物的危害及檢測(cè)目的
 

　　喹諾酮類藥物主要通過阻斷DNA回旋酶，造成細(xì)菌DNA不可逆損害來達(dá)到抗菌效果，它們具有抗菌、抗支原體、抗球蟲等作用。因喹諾酮類藥物對(duì)多種革蘭氏陰性菌具有良好的殺菌作用，且價(jià)格低廉，是養(yǎng)殖中常用到的三大類藥物之一，主要用于預(yù)防和治療畜禽及魚類的感染性病狀。食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)食品中獸藥較大殘留*(GB31650-2019)中規(guī)定允許使用的喹諾酮類藥物包括：達(dá)氟沙星、二氟沙星、恩諾沙星、氟甲喹、惡喹酸、沙拉沙星。雖然允許使用，但是也要規(guī)范用藥，嚴(yán)格把控藥物使用劑量、休藥時(shí)間、用藥對(duì)象等方面內(nèi)容。因?yàn)槿绻Z酮類藥物殘留通過食物進(jìn)入人體，會(huì)造成人類中毒、過敏，甚至致癌、致畸、致突變等嚴(yán)重后果，給消費(fèi)者的健康帶來潛在危害。
 

　　檢測(cè)項(xiàng)目：喹諾酮類藥物
 

　　應(yīng)用范圍：食品/動(dòng)物源性食品/豬肉、豬肝、豬腎、牛奶、雞蛋等
 

　　方法原理：用0.1mol/LEDTA-Mcllvaine緩沖液(pH4.0)提取樣品中的喹諾酮類抗生素，經(jīng)過濾和離心后，上清液經(jīng)HLB固相萃取柱凈化。高效液相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜測(cè)定，用陰性樣品基質(zhì)加標(biāo)外標(biāo)法定量。
 

　　前處理儀器：電子天平：感量0.0001g和0.01g；組織勻漿機(jī)；旋渦混合器；冷凍離心機(jī)(較高轉(zhuǎn)速大于10000r/min)；聚丙烯離心管(50mL)；酸度計(jì)(0.01)；氮吹儀；固相萃取儀
 

　　檢測(cè)儀器：LC-MS/MS+ESI源
 

　　試樣制備
 

　　1、動(dòng)物肌肉和動(dòng)物內(nèi)臟
 

　　將現(xiàn)場(chǎng)采集的樣品放入小型冷凍箱中運(yùn)輸?shù)綄?shí)驗(yàn)室，在-10℃以下保存，一周內(nèi)進(jìn)行處理。取適量新鮮或冷凍解凍的動(dòng)物組織樣品去筋、搗碎均勻。
 

　　2、牛奶
 

　　將現(xiàn)場(chǎng)采集的樣品放入小型冷凍箱中運(yùn)輸?shù)綄?shí)驗(yàn)室，在-10℃以下保存，一周內(nèi)進(jìn)行處理。取適量新鮮或冷凍解凍的樣品混合均勻。
 

　　3、雞蛋
 

　　將現(xiàn)場(chǎng)采集的樣品放入小型冷凍箱中運(yùn)輸?shù)綄?shí)驗(yàn)室，在-10℃以下保存，一周內(nèi)進(jìn)行處理。取適量新鮮的樣品，去殼后混合均勻。
 

　　前處理方法
 

　　1.提取
 

　　動(dòng)物肌肉組織、肝臟、腎臟
 

　　稱取均質(zhì)試樣5.0g(精確到0.1g)，置于50mL聚丙烯離心管中，加入20mL0.1mol/LEDTA-Mcllvaine緩沖溶液，1000r/min旋渦混合1min，超聲提取10min，10000r/min離心5min(溫度低于5℃)，提取三次，合并上清液。
 

　　牛奶和雞蛋
 

　　稱取均質(zhì)試樣5.0g(精確到0.01g)，置于50mL聚丙烯離心管中，加入40mL0.1mol/LEDTA-Mcllvaine緩沖溶液溶解，1000r/min旋渦混合1min，超聲提取10min，10000r/min離心10min(溫度低于5℃)，取上清液。
 

　　2、凈化
 

　　HLB固相萃取柱(200mg,6mL)，使用時(shí)用6mL甲醇洗滌、6mL水活化。將提取液以2mL/min~3mL/min的速度過柱，棄去濾液，用2mL5%甲醇水溶液淋洗，棄去淋洗液，將小柱抽干，再用6mL甲醇洗脫并收集洗脫液。洗脫液用氮?dú)獯蹈?，?mL0.2%甲酸水溶液溶解，1000r/min旋渦混合1min，用于上機(jī)檢測(cè)。
 

　　注意事項(xiàng)
 

　　1、濃度為1mg/mL的喹諾酮標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)儲(chǔ)備液可在-20℃冰箱中避光保存3個(gè)月。
 

　　2、該國(guó)標(biāo)方法采用三次提取肉類樣品沉淀物的方式提高回收率。
 

　　3、在固相萃取凈化過程中，淋洗后一定擠干小柱，防止洗脫時(shí)水進(jìn)入洗脫液，導(dǎo)致濃縮過程中氮?dú)獯挡桓上疵撘?，影響定量的?zhǔn)確性。
 

　　4、由于該國(guó)標(biāo)方法沒有使用同位素內(nèi)標(biāo)來校正回收率，建議使用相應(yīng)的空白樣品基質(zhì)提取液配制標(biāo)準(zhǔn)曲線。還可以購(gòu)置相對(duì)應(yīng)的同位素內(nèi)標(biāo)，配合液質(zhì)儀檢測(cè)使用。
 

　　5、配制EDTA-Mcllvaine緩沖溶液時(shí)，建議配合使用磁力攪拌器，省時(shí)省力，使乙二胺四乙酸二鈉*溶解。
 

　　6、定容液渦旋混合復(fù)溶，有需要時(shí)可以超聲30s，提高復(fù)溶效率。