英文名稱：Anti-SIAH2抗體

中文名稱：泛素連接酶Siah2

上海研盟生物科技有限公司Anti-SIAH2抗體*，主要應(yīng)用于WB、IHC、IF、ELISA、流式細(xì)胞術(shù)等實驗中。說明書隨貨發(fā)送，您也可以直接我司在線客服索取。客服:.

別    名：Seven in Absentia Homolog 2; Ubiquitin Ligase Siah2; SIAH2_HUMAN; E3 ubiquitin-protein ligase SIAH2; Seven in absentia homolog 2; Siah-2; hSiah2.   

此產(chǎn)品本公司有標(biāo)記的一抗出售，相關(guān)標(biāo)記有：Alexa Fluor 350 標(biāo)記、Alexa Fluor 488 標(biāo)記、Alexa Fluor 555 標(biāo)記、Alexa Fluor 647 標(biāo)記、AP標(biāo)記、APC標(biāo)記、Biotin標(biāo)記、Cy3標(biāo)記、Cy5標(biāo)記、Cy5.5標(biāo)記、Cy7標(biāo)記、FITC標(biāo)記、Gold標(biāo)記、HRP標(biāo)記、PE標(biāo)記、PE-Cy3標(biāo)記、PE-CY5標(biāo)記、PE-CY5.5標(biāo)記、PE-CY7標(biāo)記、RBITC標(biāo)記

泛素連接酶Siah2背景介紹：Siah2 is a E3 Ubiquitin ligase protein that mediates ubiquitination and subsequent proteasomal degradation of target proteins. E3 ubiquitin ligases accept ubiquitin from an E2 ubiquitin-conjugating enzyme in the form of a thioester and then directly transfer the ubiquitin to targets. Siah2 triggers the ubiquitin-mediated degradation of many proteins, including transcription regulators (e.g. POU2AF1, PML, NCOR1), cell surface receptors (e.g. DCC), antiapoptotic proteins (e.g. BAG1), and proteins involved in synaptic vesicle function in neurons (e.g. SYP). Siah2 has some overlapping function with SIAH1 but is able to trigger the ubiquitin-mediated degradation of TRAF2, whereas SIAH1 can not.

規(guī)格：0.1ml/0.2ml

濃度：1mg/1ml

抗體來源：本公司抗體有兔來源和鼠來源等

克隆類型：兔來源為多抗，鼠來源為單抗

產(chǎn)品類型：一抗

泛素連接酶Siah2,Anti-SIAH2抗體保存條件：Store at -20 °C for one year. Avoid repeated freeze/thaw cycles. The lyophilized antibody is stable at room temperature for at least one month and for greater than a year when kept at -20°C. When reconstituted in sterile pH 7.4 0.01M PBS or diluent of antibody the antibody is stable for at least two weeks at 2-4 °C.

避免反復(fù)凍融，保質(zhì)期一年。

實驗注意事項：

1、 把聚丙烯酰胺凝膠中的蛋白質(zhì)電泳轉(zhuǎn)移到硝酸纖維膜上；

a. 轉(zhuǎn)移緩沖液洗滌凝膠和硝酸纖維素膜，將硝酸纖維素膜鋪在凝膠上，用5ml移液管在凝膠上來回滾動去除所有的氣泡

b. 在凝膠/濾膜外再包一張3mm濾紙（預(yù)先用轉(zhuǎn)移緩沖液浸濕），將凝膠夾在中間，保持濕潤和沒有氣泡

c. 將此濾紙/凝膠/薄膜濾紙按照廠家建議方法放入電泳裝置中，凝膠面向陰極

d. 將上述裝置放入緩沖液槽中，并灌滿轉(zhuǎn)移緩沖液以淹沒凝膠

e. 按照廠家所示接通電源開始電泳轉(zhuǎn)移

f. 轉(zhuǎn)移結(jié)束后，取出薄膜和凝膠，棄去凝膠

2、 將薄膜漂在氨基黑中快速染色，直至分子量標(biāo)準(zhǔn)顯現(xiàn)時取出，記錄下標(biāo)準(zhǔn)位置；

3、 用100ml水洗滌纖維素膜，必要時可用脫色緩沖液；

4、 膜置印跡緩沖液中于37℃保溫1小時；

5、 室溫下，用PBS-Tween緩沖液洗滌薄膜

6、 用封口機將薄膜封入塑料袋中，盡可能不留空氣；

7、 袋的一角剪一緩沖液的小口，用透析袋夾緊；

8、 混合：NGS(100微升)，印跡緩沖液中的抗體（2.5-5毫升），加在裝薄膜的袋中，于室溫下?lián)u動2小時（或4℃過ye）；

9、 用總體積300ml PBS-Tween緩沖液，分4次在一淺盤中洗滌薄膜，每次75ml；

10、將連接*的羊抗兔IgG（40微升溶于10毫升印跡緩沖液/100微升 NGS）加在袋內(nèi)，于室溫下?lián)u動1小時；

11、按步驟9洗滌；

12、加入抗生素蛋白-HRP（40微升溶于10毫升印跡緩沖液/100微升 NGS），于室溫下?lián)u動；

13、Western Blot中轉(zhuǎn)移在膜上的蛋白處于變性狀態(tài)，空間結(jié)構(gòu)改變，因此那些識別空間表位的抗體不能用于Western Blot檢測。這種情況可以將表達目的蛋白的細(xì)胞或細(xì)胞裂解液中的所有蛋白物素化，再用酶標(biāo)記親和素進行Western Blot。實驗中取膠和膜需帶手套。

泛素連接酶Siah2,Anti-SIAH2抗體功能區(qū)的作用：

（1）VL和VH：結(jié)合抗原決定簇（FV區(qū)）

（2）CL和CH：具有同種異型的遺傳標(biāo)記

（3）CH2：結(jié)合補體

（4）CH3：結(jié)合Fc受體

抗原結(jié)合點由L鏈和H鏈超變區(qū)組成，與相應(yīng)抗原上的表位互補，借助靜電力，氫鍵以及范德華力等次級鍵相結(jié)合。

Western Blotting 實驗步驟概述：

1、 組織取材：組織塊稱重

2、 利用液氮、研缽粉碎組織塊

3、 加入RIPA緩沖液（每克組織3ml RIPA），PMSF（每克組織30μl，10 mg/ml PMSF），

利用Polytron進一步勻漿（15,000轉(zhuǎn)/分*1分鐘）維持4℃

4、 加入PMSF（每克組織30μl，10 mg/ml PMSF），冰上孵育30分鐘

5、 移入離心管4℃，約20,000g（約15,000轉(zhuǎn)）15分鐘

6、 上清液為細(xì)胞裂解液可分裝-20℃保存

7、 進行Bradford比色法測定蛋白質(zhì)濃度

8、 取相同質(zhì)量的細(xì)胞裂解液（體積*蛋白質(zhì)濃度），并加等體積的2×電泳加樣緩沖液

9、 沸水浴中3分鐘

10、上樣

11、電泳（濃縮膠20mA，分離膠35mA）

12、電轉(zhuǎn)膜儀轉(zhuǎn)膜（100mA 40分鐘）

13、膜用麗春紅染色，膠用考馬斯亮藍染色

14、Westernblot 試劑盒顯色

15、分析比較記錄

溶解方法:

方法1：我們的抗體（凍干粉）已經(jīng)包含了0.01M PBS、1% BSA和0.1% 防腐劑（疊氮鈉或*），您只需要加入滅菌的雙蒸水就行了?？贵w溶解后，置于-20℃保存，分裝后使用，避免反復(fù)凍融，可保證至少1年有效；

方法2：也可以只加入一半體積的雙蒸水，再用一半體積的甘油補足，置于-20℃保存，這樣抗體不會凍，有利于抗體的穩(wěn)定。

后續(xù)試驗時，再使用對應(yīng)的緩沖液稀釋成工作液，即用即配。

我們的抗體（凍干粉），在常溫放置下，至少一個月有效；若在-20℃下保存（*），至少三年有效。

相關(guān)優(yōu)質(zhì)產(chǎn)品：

GnRHR(Gonadotropin-releasing hormone receptor)  *釋放激素受體抗體
GRP75(G protein-coupled receptor 75)  G蛋白偶聯(lián)受體75抗體
GPA/GYPA/CD235a  血型糖蛋白A（涎糖蛋白）抗體
GPR78(G protein-coupled receptor 78)  G蛋白偶聯(lián)受體78抗體
KiSS-1R/GPR54/GPCR54(KiSS-1 receptor/G-Protein Coupled Receptor 54)  G蛋白偶聯(lián)受體54抗體
GPR109A/HM74A  G蛋白偶聯(lián)受體109A抗體
GRK1 (G-protein coupled receptor kinase 1)  G蛋白偶合受體激酶1抗體
GRK2/BARK1 (G-protein coupled receptor kinase 2)  G蛋白偶合受體激酶2抗體
GRM2/GLUR2 (Glutamate Receptor Metabotropic 2)  促代謝型*受體2抗體
GRM3/GLUR3/MGLUR3 (Glutamate Receptor Metabotropic 3)  促代謝型*受體M3抗體
GRM1(Glutamate Receptor Metabotropic 1)  促代謝型*受體1抗體
GRM4/mGluR4 (Glutamate Receptor Metabotropic 4)  促代謝型*受體4抗體
GRM5/mGluR5 (Glutamate Receptor Metabotropic 5)  促代謝型*受體5抗體
GROα/GRO-1/MGSA/CXCL1 protein (growthregulated oncogene α)  生長調(diào)節(jié)致癌基因α/黑素瘤生zhang刺激因子α /生長調(diào)節(jié)致癌基因-1抗體
MIP2/GROβ/CXCL2   巨噬細(xì)胞炎癥蛋白2抗體