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江蘇菲亞生物科技有限公司
主營產(chǎn)品： 轉(zhuǎn)化生長因子 elisa試劑盒,植物葉酸 elisa試劑盒,豬藍(lán)耳(PRRS)elisa kit |
公司信息
魚甲狀腺素（T4）酶聯(lián)免疫分析說明
2018-8-31 閱讀(253)
| 提 供 商 | 江蘇菲亞生物科技有限公司 | 資料大小 | 86.5KB |
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| 資料圖片 | 下載次數(shù) | 30次 | |
| 資料類型 | WORD 文檔 | 瀏覽次數(shù) | 253次 |
使用目的：
本試劑盒用于測定魚血清、血漿及相關(guān)液體樣本中甲狀腺素(T4)含量。
實驗原理
本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測定標(biāo)本中魚甲狀腺素(T4)水平。用純化的魚甲狀腺素(T4)抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入甲狀腺素(T4)，再與HRP標(biāo)記的甲狀腺素(T4)抗體結(jié)合，形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物，經(jīng)過*洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成終的黃色。顏色的深淺和樣品中的甲狀腺素(T4)呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長下測定吸光度（OD值），通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計算樣品中魚甲狀腺素(T4)濃度。
試劑盒組成
1 | 30倍濃縮洗滌液 | 20ml×1瓶 | 7 | 終止液 | 6ml×1瓶 |
2 | 酶標(biāo)試劑 | 6ml×1瓶 | 8 | 標(biāo)準(zhǔn)品（160μg/L） | 0.5ml×1瓶 |
3 | 酶標(biāo)包被板 | 12孔×8條 | 9 | 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液 | 1.5ml×1瓶 |
4 | 樣品稀釋液 | 6ml×1瓶 | 10 | 說明書 | 1份 |
5 | 顯色劑A液 | 6ml×1瓶 | 11 | 封板膜 | 2張 |
6 | 顯色劑B液 | 6ml×1/瓶 | 12 | 密封袋 | 1個 |
標(biāo)本要求
1．標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取，提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行，提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實驗。若不能馬上進(jìn)行試驗，可將標(biāo)本放于-20℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融
2．不能檢測含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。
操作步驟
1.標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋：本試劑盒提供原倍標(biāo)準(zhǔn)品一支，用戶可按照下列圖表在小試管中進(jìn)行稀釋。
80μg/L | 5號標(biāo)準(zhǔn)品 | 150μl的原倍標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液 |
40μg/L | 4號標(biāo)準(zhǔn)品 | 150μl的5號標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液 |
20μg/L | 3號標(biāo)準(zhǔn)品 | 150μl的4號標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液 |
10μg/L | 2號標(biāo)準(zhǔn)品 | 150μl的3號標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液 |
5μg/L | 1號標(biāo)準(zhǔn)品 | 150μl的2號標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液 |
2.加樣：分別設(shè)空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑，其余各步操作相同）、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測樣品孔。在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)確加樣50μl，待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測樣品10μl（樣品終稀釋度為5倍）。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。
3.溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。
4.配液：將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用
5.洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復(fù)5次，拍干。
6.加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑50μl，空白孔除外。
7.溫育：操作同3。
8.洗滌：操作同5。
9.顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘.
10.終止：每孔加終止液50μl，終止反應(yīng)（此時藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色）。
測定：以空白空調(diào)零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）。 測定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行。
