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江蘇菲亞生物科技有限公司
主營(yíng)產(chǎn)品： 轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子 elisa試劑盒,植物葉酸 elisa試劑盒,豬藍(lán)耳(PRRS)elisa kit |
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如何調(diào)整人ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)的對(duì)策
2019-1-22 閱讀(1760)
ELISA試驗(yàn)以靈敏度較高、特異性較好的特點(diǎn)在科研上得到了廣泛的應(yīng)用，但操作中的各個(gè)環(huán)節(jié)對(duì)試驗(yàn)的檢測(cè)效果影響較大，人ELISA試劑盒如不注意，有可能導(dǎo)致顯色不全、花板等結(jié)果。
下面將操作中各個(gè)環(huán)節(jié)常出現(xiàn)問題解決辦法總結(jié)于下：
選擇試劑：
選擇質(zhì)量?jī)?yōu)良的檢測(cè)試劑，嚴(yán)格按照試劑說明書進(jìn)行操作，操作前將試劑在室溫下平衡30-60分鐘。
標(biāo)本收集與保存：
避免使用肉眼可見的溶血標(biāo)本、高脂標(biāo)本和混濁標(biāo)本；2-8℃下，標(biāo)本可放置24-48小時(shí)，長(zhǎng)期保存需放置-20℃下。
請(qǐng)避免反復(fù)凍融。
試劑盒中會(huì)有提示，一般需要準(zhǔn)備的有：
洗滌液；用前配制；有的試劑盒會(huì)標(biāo)明，配好的4度下一般可以放一個(gè)月；如果沒有標(biāo)明，盡量用新鮮的，不要多配制。
顯色液（有A液和B液的），用前15分鐘配制；
標(biāo)準(zhǔn)品：有的試劑盒中標(biāo)準(zhǔn)品是已經(jīng)配制好的，4度保存；有的是要現(xiàn)配制的；按照說明書操作；
濃縮生物素結(jié)合的二抗和HRP：如果需要配制，試劑盒沒注明配好可以保存多久的話，盡量現(xiàn)配現(xiàn)用（用前15分鐘配制）；
原則是：試劑盒上沒有指出配制物的儲(chǔ)藏方式的話，應(yīng)該現(xiàn)配現(xiàn)用；不要怕麻煩；還有小瓶的管子開蓋前要離心，以免蓋子上粘連以后總量不夠。
加 樣：室溫溫育的試劑，特別是溫育時(shí)間比較短的實(shí)驗(yàn)操作的試劑，加樣對(duì)數(shù)據(jù)的影響比較大，特別要注意加樣問題。
不好的操作原因：
1、不會(huì)正確使用加樣器；
2、血清或血漿標(biāo)本分離不好即進(jìn)行加樣；
3、人ELISA試劑盒手工操作中，加樣板過多造成加樣後放入孵箱前等待時(shí)間過長(zhǎng)（特別是室內(nèi)溫度較高時(shí)）；
4、加完標(biāo)本再加酶試劑時(shí)酶濺出孔外。
