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人熱休克蛋白90ELISA檢測(cè)試劑盒

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人熱休克蛋白90ELISA檢測(cè)試劑盒★南京金益柏★elisa步驟？回答：方法一：用于檢測(cè)未知抗原的雙抗體夾心法：
1. 包被：用0.05M PH9,碳酸鹽包被緩沖液將抗體稀釋至蛋白質(zhì)含量為1～10μg／ml,在每個(gè)聚苯乙烯板的反應(yīng)孔中加0.1ml,4℃過夜.次日,棄去孔內(nèi)溶液,用洗滌緩沖液洗3次,每次3分鐘.
2. 加樣：加一定稀釋的待檢樣品0.1ml于上述已包被之反應(yīng)孔中,置37℃孵育1小時(shí).。

詳細(xì)介紹

人熱休克蛋白90ELISA檢測(cè)試劑盒★南京金益柏★elisa步驟？回答：方法一：用于檢測(cè)未知抗原的雙抗體夾心法：
1. 包被：用0.05M PH9,碳酸鹽包被緩沖液將抗體稀釋至蛋白質(zhì)含量為1～10μg／ml,在每個(gè)聚苯乙烯板的反應(yīng)孔中加0.1ml,4℃過夜.次日,棄去孔內(nèi)溶液,用洗滌緩沖液洗3次,每次3分鐘.
2. 加樣：加一定稀釋的待檢樣品0.1ml于上述已包被之反應(yīng)孔中,置37℃孵育1小時(shí).然后洗滌.（同時(shí)做空白孔,陰性對(duì)照孔及陽(yáng)性對(duì)照孔）.
3. 加酶標(biāo)抗體：于各反應(yīng)孔中,加入新鮮稀釋的酶標(biāo)抗體（經(jīng)滴定后的稀釋度）0.1ml,37℃孵育0.1小時(shí),洗滌.
4. 加底物液顯色：于各反應(yīng)孔中加入臨時(shí)配制的TMB底物溶液0.1ml,37℃10～30分鐘.
5. 終止反應(yīng)：于各反應(yīng)孔中加入2M硫酸0.05ml.
6. 結(jié)果判定：可于白色背景上,直接用肉眼觀察結(jié)果：反應(yīng)孔內(nèi)顏色越深,陽(yáng)性程度越強(qiáng),陰性反應(yīng)為無色或極淺,依據(jù)所呈顏色的深淺,以“+”、“-”號(hào)表示.也可測(cè)OD值：在ELISA檢測(cè)儀上,于450nm（若以ABTS顯色,則410nm）處,以空白對(duì)照孔調(diào)零后測(cè)各孔OD值,若大于規(guī)定的陰性對(duì)照OD值的2.1倍,即為陽(yáng)性.
方法二：用于檢測(cè)未知抗體的間接法：
用包被緩沖液將已知抗原稀釋至1～10μg／ml,每孔加0.1ml,4℃過夜.次日洗滌3次.加一定稀釋的待檢樣品（未知抗體）0.1ml于上述已包被之反應(yīng)孔中,置37℃孵育1小時(shí),洗滌.（同時(shí)做空白、陰性及陽(yáng)性孔對(duì)照）于反應(yīng)孔中,加入新鮮稀釋的酶標(biāo)第二抗體（抗抗體）0.1ml,37℃孵育30～60分鐘,洗滌,zui后一遍用DDW洗滌.其余步驟同“雙抗體夾心法”的4、5、6.

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