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上海鈺博生物科技有限公司
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閱讀：2959發(fā)布時間：2018-1-23
細胞內(nèi)由微絲、微管、中間纖維等交織形成一個十分復(fù)雜的立體網(wǎng)絡(luò)結(jié)構(gòu)。它們對于細胞形狀的保持、細胞內(nèi)物質(zhì)運輸、細胞運動、細胞內(nèi)各結(jié)構(gòu)相對位置的固定都有重要作用，故而稱為細胞骨架。
細胞骨架在通常固定條件下不穩(wěn)定，如低溫、高壓、酸處理等。當(dāng)采用適當(dāng)?shù)氖侄?，如M-緩沖液洗滌細胞，可以提高細胞骨架的穩(wěn)定性，戊二醛在室溫下固定能較好的保存細胞骨架的成分，另外，Triton X-100處理能抽取掉一部分 雜蛋白，可使骨架成分顯現(xiàn)的更加清晰。
微絲、微管、中間纖維等都是直徑很小的結(jié)構(gòu)。zui大的單根微管才25nm左右，只能在電鏡下才能看見，目前研究細胞骨架的主要方法是應(yīng)用高壓電鏡或免疫熒光顯微技術(shù)，本實驗用普通光鏡觀察到細胞骨架，是因為骨架纖維成束分布，結(jié)構(gòu)經(jīng)染色以后，有夸大作用。由于細胞經(jīng)Triton X-100提取剩下的主要成分是細胞骨架成分，使得顯現(xiàn)等價清晰。
M-緩沖液（配制方法如下）：
咪唑 2.90g
KCl 3.70g MgCl2 0.012g
EGTA 0.38g EDTA 0.042g
巰基乙醇 0.086ml 加水到 1000 ml
6mM磷酸緩沖液
KH2PO4 0.74g
Na2HPO4•12H2O 2.4g
加水到 1000 ml
１％Triton X-100：以M-緩沖液配制
３％戊二醛： 25％戊二醛 12 ml 6nm磷酸緩沖液 88 ml
染料： 考馬斯亮藍 R-250 0.2g 冰醋酸 7 ml
甲醇 46.5 ml 蒸餾水 46.5 ml
器材：顯微鏡、燒杯、吸管、鑷子、載片、蓋片
材料：洋蔥鱗莖
１.撕取洋蔥鱗莖內(nèi)表皮表皮細胞（約1cm2）若干片置于盛有6mH pH6.8磷酸緩沖液中，使其下沉。
２.吸去磷酸緩沖液，加入１％Triton X-100處理２０－３０分鐘
。
３.吸去Triton X-100，用M-緩沖液洗三次，每次三分鐘。
４.３％戊二醛固定３０－６０分鐘。
５.pH6.8磷酸緩沖液洗三次，每次十分鐘。
６.0.2%考馬斯亮藍 R-250染色20-30分鐘。
７.用蒸餾水洗1-2次，細胞置于載玻片上，加蓋玻片，于普通光學(xué)顯微鏡下觀察，就可以看到由微絲、微管組成的網(wǎng)絡(luò)。
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