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預(yù)防支原體污染的細(xì)胞培養(yǎng)方法

閱讀:410發(fā)布時(shí)間:2017-6-23

在實(shí)驗(yàn)室中通過熟練的操作新工人的準(zhǔn)確監(jiān)督,遵守良好的無菌操作技術(shù)可以幫助減少支原體污染的風(fēng)險(xiǎn)。強(qiáng)烈建議準(zhǔn)備所有的細(xì)胞污染事故的報(bào)告,以解決污染問題。本文威正翔禹/締一生物為您分析預(yù)防支原體污染的細(xì)胞培養(yǎng)方法。

測試文化污染

由于支原體的主要來源之一是從國外引進(jìn)的細(xì)胞培養(yǎng),建議從可靠的電池供應(yīng)銀行的細(xì)胞。

在支原體污染的細(xì)胞培養(yǎng)的隔離區(qū)中的存在和缺乏獨(dú)立的孵化器的情況下,應(yīng)只在有蓋的塑料盒瓶。不要使用盤子和啟封菜肴檢疫。在懷疑培養(yǎng)物的情況下,處理它們?cè)诤蟮乃衅渌?xì)胞培養(yǎng)工作的工作結(jié)束時(shí)完成時(shí),使用分離介質(zhì)和試劑,zui后消毒層流罩后工作時(shí)盡量。

僅使用抗生素負(fù)責(zé)任

雖然用于細(xì)胞培養(yǎng)應(yīng)消除所有的污染物理想抗生素,是無毒的宿主細(xì)胞,而不是與實(shí)驗(yàn)干擾,沒有可用的抗生素滿足以上的標(biāo)準(zhǔn)。因此,在細(xì)胞培養(yǎng)的抗生素的應(yīng)用應(yīng)限制。相反,一個(gè)良好的無菌做法起著預(yù)防污染的重要作用。

在細(xì)胞培養(yǎng)物的微生物污染是無抗生素是通過在細(xì)胞培養(yǎng)基中混濁或顏色的變化檢測的。

在細(xì)胞培養(yǎng)使用抗生素的情況下,有四種可能:

1.對(duì)抗生素的敏感性。

2.抗生素抗性。

3.對(duì)抗生素局部阻力。

4.抗抗生素僅由支原體。

zui后一個(gè)是zui差的污染,因?yàn)橹гw可以通過氣溶膠傳播。在抗生素敏感性的情況下,抗生素防止細(xì)菌和真菌的培養(yǎng),但沒有能力從開始解除支原體。因此,連續(xù)使用抗生素為在細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)間長,不僅是沒有幫助的,但也可引起更多的問題。然而,在原代培養(yǎng)中使用的抗生素(*/*),用于短期(前兩周)是至關(guān)重要的。由于抗生素是在介質(zhì)中不穩(wěn)定,強(qiáng)烈建議用新鮮培養(yǎng)基替換含抗生素培養(yǎng)基每隔兩三天。

丟棄或治療支原體污染的細(xì)胞

在其中真正有價(jià)值和稀有細(xì)胞支原體污染的情況下,建議對(duì)待他們,消除支原體感染。否則,建議丟棄支原體污染的細(xì)胞,因?yàn)樗鼈儽徽J(rèn)為是污染的在實(shí)驗(yàn)室源。

任何來源的檢疫新細(xì)胞

正如前面章節(jié)中描述,這是從其他實(shí)驗(yàn)室?guī)砹诵碌募?xì)胞的特點(diǎn)是污染的主要來源。因此,有必要隔離細(xì)胞,并利用它們作任何用途之前檢查支原體污染。

減少氣溶膠的產(chǎn)生

在層流罩或在孵化的細(xì)胞操縱和也氣溶膠制成時(shí)氣溶膠的人員可以在實(shí)驗(yàn)室中傳送支原體污染。因此,這導(dǎo)致在制造氣溶膠避免活動(dòng)可有助于防止在細(xì)胞培養(yǎng)物的支原體污染。

支原體測試的重要性

其中正在使用或在美國以及歐洲的細(xì)胞銀行細(xì)胞支原體污染率約為15%至35%。


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