試驗原理：
        VISFATIN試劑盒是固相夾心法酶聯(lián)免疫吸附實驗（ELISA）.已知VISFATIN濃度的標準品、未知濃度的樣品 加入微孔酶標板內進行檢測。先將VISFATIN和生物素標記的抗體同時溫育。洗滌后，加入親和素標記過的HRP。再經(jīng)過溫育和洗滌，去除未結合的酶結合物，然后加入底物A、B，和酶結合物同時作用。產(chǎn)生顏色。顏色的深淺和樣品中VISFATIN的濃度呈比例關系。

試劑盒內容及其配制：
試劑盒成份 96孔配置 48孔配置
96/48人份酶標板 1塊板（96T） 半塊板（48T）
塑料膜板蓋 1塊 半塊
標準品：200ng/ml 1瓶（1.0ml） 1瓶（0.5ml）
空白對照 1瓶（1.0ml） 1瓶（0.5ml）
標準品稀釋緩沖液 1瓶（8.0ml） 1瓶（4.0ml）
生物素標記的抗VISFATIN抗體 1瓶（8.0ml） 1瓶（4.0ml）
親和鏈酶素-HRP 1瓶（12ml） 1瓶（5ml）
洗滌緩沖液 1瓶（20ml） 1瓶（10ml）
底物A 1瓶（6.0ml） 1瓶（3.0ml）
底物B 1瓶（6.0ml） 1瓶（3.0ml）
終止液 1瓶（6.0ml） 1瓶（3.0ml）

自備材料：
1. 蒸餾水。
2. 加樣器：5ul、10ul、50ul、100ul、200ul、500ul、1000ul。
3. 振蕩器及磁力攪拌器等。

樣品收集、處理及保存方法：

1、 血清……操作過程中避免任何細胞刺激。使用不含熱原
和內毒素的試管。收集血液后，1000×g離心10分鐘將血紅

細胞迅速小心地分離。
2、 血漿……EDTA、檸檬酸鹽、肝素血漿可用于檢測。1000×g離心30分鐘去除顆粒。
3、 細胞上清液……1000×g離心10分鐘去除顆粒和聚合物。
4、 組織勻漿……將組織加入適量生理鹽水搗碎。1000×g離心10分鐘，取上清液。
5、 保存……如果樣品不立即使用，應將其分成小部分-70℃保存，避免反復冷凍。盡可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量顆粒，檢測前先離心或過濾。不要在37℃或更高的溫度加熱解凍。應在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。

操作注意事項：

● 試劑應按標簽說明書儲存，使用前恢復到室溫。稀稀過后的標準品應丟棄，不可保存。
● 實驗中不用的板條應立即放回包裝袋中，密封保存，以免變質。
● 不用的其它試劑應包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用。保質前使用。
● 使用一次性的吸頭以免交叉污染，吸取終止液和底物A、B液時，避免使用帶金屬部分的加樣器。
● 使用干凈的塑料容器配置洗滌液。使用前充分混勻試劑盒里的各種成份及樣品。
● 底物A應揮發(fā)，避免長時間打開蓋子。底物B對光敏感，避免長時間暴露于光下。避免用手接觸，有毒。實驗完成后應立即讀取OD值。
● 加入試劑的順序應一致，以保證所有反應板孔溫育的時間一樣。
● 按照說明書中標明的時間、加液的量及順序進行溫育操作。