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培養(yǎng)基在使用過程中需注意的各種要求

時(shí)間:2018/6/22閱讀:1298
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    培養(yǎng)基Medium)是供微生物、植物組織和動(dòng)物組織生長和維持用的人工配制的養(yǎng)料,一般都含有碳水化合物、含氮物質(zhì)、無機(jī)鹽(包括微量元素)以及維生素和水等。不同培養(yǎng)基可根據(jù)實(shí)際需要,添加一些自身無法合成的化合物,即生長因子。有些微生物,如自養(yǎng)型微生物,不需要碳源,所以上述物質(zhì)只具有一般性。

    培養(yǎng)基由于配制的原料不同,使用要求不同,而貯存保管方面也稍有不同。一般培養(yǎng)基在受熱、吸潮后,易被細(xì)菌污染或分解變質(zhì),因此一般培養(yǎng)基必須防潮、避光、陰涼處保存。對一些需嚴(yán)格滅菌的培養(yǎng)基(如組織培養(yǎng)基),較長時(shí)間的貯存,必須放在3-6℃的冰箱內(nèi)。由于液體培養(yǎng)基不易長期保管,均改制成粉末。

培養(yǎng)基在使用前通過高壓或過濾滅菌。防止污染應(yīng)該注意以下要求:

    確認(rèn)工作細(xì)胞庫是否被污染,確認(rèn)毒種工作種子批是否被污染,確認(rèn)所用培養(yǎng)基及其添加成分(小牛血清、NaHCO3)是否被污染,均可用細(xì)菌、真菌及支原體無菌試驗(yàn)來確認(rèn)并排除。同時(shí)要對無菌試驗(yàn)培養(yǎng)基的靈敏度進(jìn)行驗(yàn)證。實(shí)際生產(chǎn)中,可以從配制好的培養(yǎng)液中取少量加入營養(yǎng)瓊脂于恒溫培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng),48小時(shí)即可觀察有無污染。

    其它:高壓滅菌設(shè)備、過濾除菌設(shè)備均應(yīng)進(jìn)行驗(yàn)證,確保滅菌和除菌效果;前者應(yīng)在投產(chǎn)前及其后的每6個(gè)月進(jìn)行驗(yàn)證,后者應(yīng)在每次除菌前、后進(jìn)行驗(yàn)證工作(至少應(yīng)在除菌后進(jìn)行一次)。

    另外,應(yīng)將有毒區(qū)與無毒區(qū)嚴(yán)格分開,并有各自獨(dú)立的空氣凈化系統(tǒng)及孵室,有毒區(qū)對無毒區(qū)應(yīng)保持相對負(fù)壓,防止病毒對培養(yǎng)細(xì)胞(尤其是細(xì)胞庫)的污染。

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