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ELISA試劑盒說明上寫封閉液用蔗糖溶液,一般是用BSA或酪蛋白的蛋白分子封閉空白位點,蔗糖封閉的原理:
1、ELISA試劑盒實驗中,蔗糖本身沒有封閉作用。
2、封閉液一般是BSA、酪蛋白等或者是Tween等。(Tween的作用:雖然不能單獨封閉,但和BSA在封閉時會起到清洗非特異性結(jié)合或結(jié)合不牢固的蛋白的作用,假如抗體包被在板上會出現(xiàn)YY)
3、加蔗糖的主要目的是保護(hù)ELISA試劑盒板子吸附(包被)的蛋白,起到“保護(hù)劑”的作用。
4、蔗糖溶液一般在ELISA試劑盒板子經(jīng)過BSA封閉后加,當(dāng)然也有將蔗糖加到封閉液中同時進(jìn)行處理;那一種更好需要你實驗后來驗證。但多數(shù)選擇前者。
封閉劑還可用5%的脫脂乳(市售即可),0.4%的明膠,但是實驗表明前者比較好,后者不容易洗干凈未結(jié)合上的明膠。
封閉劑的原理就是與酶聯(lián)板上未結(jié)合抗原或抗體的微孔中用封閉劑封閉上,結(jié)合抗體或抗原的時候就不會產(chǎn)生非特異結(jié)合了,不會影響實驗的準(zhǔn)確度。
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